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摘 要

高原土壤与其它区域的土壤微生物区系存在巨大差异。本研究对高原土壤微生物采用稀释平板涂布法，使用R2A培养基筛选并纯化革兰氏阳性菌，筛选出143个菌株。革兰氏阳性菌对枯萎镰刀菌的拮抗测试可以使用PDA平板对峙法，其中对枯萎镰刀菌抑制作用强的有17株，抑制作用一般的菌株28株，抑制作用弱的有38株和没有抑制作用的有60株。

关键词：革兰氏阳性菌，筛选，拮抗测试

Abstrcact : There is a huge difference in the soil microbial flora between the plateau and other regions. In this study, the use of R2A medium to screen and purify the gram positive bacteria were screened and purified by using medium. Gram positive bacteria on Fusarium wilt antagonistic test can be used PDA plate confrontation method, which on Fusarium wilt suppression strong interaction with 17 strains, the inhibition strains of the general role of 28 strains, the inhibition of the weak interaction of 38 strains and had no inhibitory effect of 60 strains.

Key words：Gram positive bacteria ，screen ，antagonistic test

目录

1引言 1

1.1发病规律 1

1.2防治措施 1

1.3研究目的 2

2 材料 2

2.1 实验材料 2

2.2 试剂 2

2.3 主要仪器 2

3 方法 3

3.1 培养基制备 3

3.1.1 灭菌操作 3

3.1.2 PDA培养基配制 3

3.1.3 改良PDA培养基 3

3.1.4 R2A培养基 3

3.2 筛选高原地区G 微生物 4

3.2.1 采集称重 4

3.2.2 测水分 4

3.2.3 浓度稀释 4

3.2.4 涂布 4

3.2.5 纯化 4

3.3高原革兰氏阳性菌拮抗能力的测定 4

3.3.1配置改良PDA培养基 4

3.3.2培养病原菌 5

3.3.3 接种高原细菌和病原菌 5

3.3.4 观察记录 5

4 筛选结果和抑菌实验 5

5讨论 6

参考文献 7

1引言

致病性尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）侵染导致的植物枯萎病是世界性的土传真菌病害。导致维管束坏死，植物枯萎死亡，在植物的整个发育期都可以发生，在生产上造成了极大的损失。国内外已经报道的受害严重的作物有棉花、甘蔗、香蕉、西红柿、黄瓜、哈密瓜、西瓜、大豆等^[1]。

镰刀菌（Fusarium ）:在分类学上，镰刀菌无性时期原属于半知菌业门，有性时期为子囊菌亚门。根据《菌物词典》2001版第9版，镰刀菌属于无性真菌类，有性时期为子囊菌门。镰刀菌常见产毒霉菌有：枯萎镰刀菌（F.oxysporum）；禾谷镰刀菌（F.graminearum）；串珠镰刀菌（F.moniliforme）；三线镰刀菌（F.trixintum）；雪腐镰刀菌（F.nivale）；梨孢镰刀菌（F.poae）；拟枝孢镰刀菌（F.sporotricoides）；木贼镰刀菌（F.equiseti）；茄病镰刀菌（F.solani）；尖孢镰刀菌（F.axysporum）^［2］。

1.1发病规律

镰刀菌枯萎病病原菌通过菌丝体或厚垣孢子在土壤、栽培基质中或附着在种子上越冬，可营腐生生活。病株根或茎的腐烂处在潮湿环境中产生子实体，孢子借气流、雨水、灌溉水的泼溅传播，通过幼根和茎基部或扦插苗的伤口侵入为害。病菌有时可能寄存在维管束系统而无症状表现，有时进入维管束系统后能马上堵塞导管，并产出有毒物质，扩散开来且逐渐向上延展，导致病株叶片枯黄而死。对寄主体内病菌扩展的研究表明，在症状出现以前，维管束内病菌扩展是比较缓慢的，但从得病植株上获取部分繁殖材料时，可能有隐藏的镰刀菌病原。因此，繁殖材料是镰刀菌枯萎病病害传播的重要来源，被污染的土壤或基质也是传播病害的来源之一。镰刀菌枯萎病发病最适宜的温度为27℃至32℃，在20℃时病害发生趋向缓和，到15℃以下时则不再发病。大苗龄的观赏植物比小苗龄的容易发病。在春夏季节，若栽培基质温度较高，潮湿，换盆、移栽或中耕时根系伤害较多，植株生长势弱则发病重。栽培中氮肥施用过多，以及偏酸性的土壤，也有利于病菌的生长和侵染，并促进病害的发生和流行。华南地区枯萎病常于4至6月份发生，云南、四川、华东地区枯萎病则常发生于5至8月^[3],［4］。

1.2防治措施

目前的农业防治措施主要是轮作，间、套作，地膜，施用有机肥； 而其他方法如嫁接法、土壤消毒法等，耗时耗力，也只是短暂地解决防治问题, 而且没有合适的抗病品种以及农药。防治土传病害的化学农药或因药效不理想，或因剧毒和难以降解的物质，对土壤水体环境有污染而被限制使用。由于长期使用化学农药，一些土壤微生物已经产生很强的抗药性,所以很多病原微生物难以消灭或者抑制。许多种化学农药严重污染水体、大气和土壤,并通过食物链进入人体,危害人群健康。所以展开以生物防治为主要防治手段对镰刀菌的防治具有非常重要的意义^[5],[6]。

1.3研究目的

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