论文总字数：13750字

摘 要

：本次研究主要采用酶学研究方法，讨论了不同LPS浓度胁迫12h、24h、48h后对日本沼虾免疫相关酶活，在此基础上研究了LPS胁迫下日本沼虾的免疫机制，研究了LPS对日本沼虾的胁迫效应，为了日本沼虾的健康养殖以及养殖水体的管理调控提供了充足的理论基础，同时也为日本沼虾应对免疫因子的应激性变化提供了宝贵的数据资料。经过实验对于所测得的数据的分析，我们得到了如下结果：在LPS对日本沼虾血清血蓝蛋白活性的影响中，日本沼虾暴露于不同浓度12h后、24h后、48h后，分别在0.1 mg/L、0.3 mg/L、0.9 mg/L处达到最大值；在LPS日本沼虾血清中AKP的影响中，日本沼虾暴露于不同浓度12h、24h、48h后，随着LPS浓度的升高，分别在0.3 mg/L、0.3 mg/L、0.9 mg/L达到最大值；在LPS胁迫对青虾血清中ACP的影响中，日本沼虾暴露于不同浓度12h、24h、48h后，分别在0.3 mg/L、0.3 mg/L、0.1 mg/L处理组达到最大值。

关键词：LPS，日本沼虾，非特异性免疫

Abstract：In this study,we used enzymatic research methods and tissue sectioning techniques to discuss the effects of different LPS concentrations on blood cells, immune_related enzyme activities, and microstructure of hepatopancreas and sputum tissues after 12h,24h and48h. The imumune mechanism of Macrobrachium nipponense under LPS stress was studied.The stress effect of LPS on Macrobrachium nipponense was studied.It provided a suffcient theoretical basis for the healthy culture of Japanese green prawn and the mannagement and regulation of aquaculture water. Shrimp provides valuable data on stress changes in immune factors. After analyzing the measureddata,we obtained the following results:In the effect of LPS on the serum hemocyanin activity of Macrobrachium nipponense, the macrobrachium nipponense was exposed to different concentrations for 12h, 24h, and 48h, respectively, reaching the maximum at 0.1mg/L, 0.3mg/L, and 0.9mg/L. value.In the effect of AKP in the serum of LPS Macrobrachium, the macrobrachium nipponense was exposed to different concentrations for 12h, 24h, 48h, and reached the concentration of 0.3mg/L, 0.3mg/, 0.9mg/LL with the increase of LPS concentration. Maximum value.In the effect of LPS stress on ACP in serum of shrimp, the macrobrachium was exposed to different concentrations of 12h, 24h and 48h, and reached the maximum in 0.3mg/L, 0.3mg/L and 0.1mg/L treatment groups.

Keywords:Lipopolysaccharide, Macrobrachium nipponense, nonspecific immunity

目 录

1前言 3

1.1日本沼虾的种质特性研究进展 3

1.2 甲壳动物的免疫学机制 3

1.3 LPS的免疫学重要特性 3

1.4 研究目的以及意义 4

2 材料与方法 4

2.1实验材料 4

2.2实验试剂 4

2.3实验仪器设备 4

2.4实验方法 4

3 LPS对日本沼虾血清中血蓝蛋白的影响 5

3.1材料与方法 5

3.2血蓝蛋白的测定方法 6

3.3关数据的处理以及分析 6

3.4 LPS对日本沼虾血清血蓝蛋白活性的影响 6

4.LPS日本沼虾血清中免疫相关酶活的影响 8

4.1材料与方法 8

4.2实验方法 8

5 LPS对青虾血清碱性磷酸酶活性影响 11

6 LPS胁迫对青虾血清中ACP的影响 12

7 LPS胁迫对日本沼虾血清SOD酶活性的影响 14

讨论 16

结论 17

参考文献 18

致谢 20

1前言

1.1日本沼虾的种质特性研究进展

日本沼虾（Macrobranchium nipponense）又叫作青虾或河虾。日本沼虾现在已经成为我国有名的名淡水养殖虾品种，广泛分布在我国淡水水域中，其繁殖力强^[1]。日本沼虾的营养丰富，肉质松软，易消化，对身体虚弱以及病后需要调养的人是好的食物，慢慢的成为人类生活中日益需求的食物之一^[2]。

日本沼虾的体形呈现为短，粗型，身型是分为两部分头腹部和胸部。头胸部以后慢慢变细小，头胸部偏大，腹部之后又变得更加细小。日本沼虾主要的味觉器官是第一对触角。感受机械的刺激的是第二对触角和身体的其他部分的触毛^[3]。在第一触角的原肢的第一肢节内有一对平衡囊，可以通过平衡囊来感知身体所处的位置和方向^[4]。雌虾卵巢已经全部愈合在一起，从卵巢的两侧分别发出一对输卵管，输卵管呈短而直的状态，向下开口位于第三步的足基部的内侧^{[5, 6]}。

1.2 甲壳动物的免疫学机制

免疫球蛋白是所有的脊椎动物甲壳动物的体液中缺乏的，所以抗体介导的免疫反应无法进行，得出结论是虾类不具备特异性免疫系统^[7]。血细胞的吞噬、包掩以及血淋巴中的一些酶或因子的杀菌、抗菌作用等是其主要的非特异性免疫，这些作用又分为细胞和体液免疫^[8]。抵御外来病原微生物的第一道防线是血细胞。甲壳动物血细胞的吞噬过程包括：异物的识别、粘连、聚集、摄入等^[8]。

1.3 LPS的免疫学重要特性

通过刺激B淋巴细胞产生特异性抗体是它的一个重要免疫学特性。此过程不需要T淋巴细胞的辅助作用，所以，LPS为胸腺非依赖抗原^[10]。虽然关于LPS对哺乳动物的免疫原性的研究已经有很长的历史，但是关于鱼类病原LPS对鱼类的免疫原性的研究则起步较晚^[11]。LPS还具有免疫佐剂特性，与其它颗粒性或可溶性抗原一起注射能使后者刺激机体产生抗体的效价明显增高^[14]。黄新新(2002)研究表明，在LPS的存在下，OMI(外膜蛋白)的免疫保护力更强，达到100％的效果^[15]。

本实验LPS能够通过注射和投喂两种形式，使日本沼虾吸收和摄入^[15]。LPS主要积累在日本沼虾的甲壳、鳃和肝胰腺中，一开始积累在甲壳中^[17]。甲壳的主要组成成分甲壳动物的鳃除了有呼吸和排泄功能外还是LPS的主要靶器官^{[18, 19]}，通过血液输送到其他组织中或者累计在表面细胞中^[20]。

1.4 研究目的以及意义

由于现在甲壳动物的免疫学研究还没有完善，免疫学知识还不够具体化，在甲壳动物免疫系统的组成特点及免疫因子如凝集素、溶血素如何产生，判断LPS还没有建立对甲壳动物非特异性免疫影响指标是什么。

2 材料与方法

2.1实验材料

此次实验的青虾在2019年3月份购于淮阴区北京北路星光菜市场。选取体长4~6cm、体重1.5~3g的健康日本沼虾，将其饲养在江苏省特色水产工程实验室，水温18(±2)℃，每天晚上投喂一次，半个月之后用于实验。

2.2实验试剂

日本沼虾抗凝剂：0.14 mol/LNacl；0.1 mol/L葡萄糖；30 mmol/L柠檬酸钠；26 mmol/L柠檬酸；10 mmol/LEDTA（配制总体积250 ml，pH=4.6）。

剩余内容已隐藏，请支付后下载全文，论文总字数：13750字