论文总字数：9335字

摘 要

：蜜蜂觅食可以将转基因油菜的外源基因转移到其它近缘植物，在带来一系列生态风险的同时，也可导致其它植物的种子或产品中（如蜂蜜等）混杂有转基因成分，甚至引发国际贸易争端。本实验首次以我国特有的中华蜜蜂和我国自主培育的转基因油菜为研究对象，收集蜜蜂在油菜花期田间蜜蜂授粉试验中采集酿造的蜂蜜进行转基因成分检测。实验结果表明：蜂蜜中混入了转基因油菜的花粉；使用bar蛋白检测试纸条，分别在不破坏蜂蜜中油菜花粉的条件下以及蜂蜜中去除油菜花粉的条件下检测了bar蛋白表达情况，结果均显示阳性，进一步说明蜜蜂觅食可以导致油菜蜜中混杂有转基因成分。我们的研究工作直接为我国转基因油菜的生态风险评价及其安全管理提供了科学依据。

关键词：蜂蜜，油菜，Bar基因

Abstract：The exogenous gene of genetically modified oilseed rape can be transferred to other closely related plants by bees foraging, and bring a series of ecological risk. It can also lead to other plants or products (such as honey, etc.) contaminating with genetically modified, even lead to international trade disputing. In this study, our unique Chinese bees and our own genetically modified oilseed rape as research subjects for the first time, collected the honey of canola flower bee pollination field trials brewed by bees for GMO detection. Experimental results showed that: honey mixed with genetically modified oilseed rape pollen. Under the conditions that the canola flower powder in honey were removed and not destroyed, using bar protein test strip to detect the expression of the protein bar. The results showed positive, it further instructions bees foraging can result in that rape honey contaminated with GMO. Our research provides a scientific basis directly for our country ecological risk assessment of GM canola and the safety management.

Keywords: honey, rape, bar gene

目 录

1 前言 4

2 材料与方法 6

2.1 试验材料 6

2.2 试验地点 6

2.3 实验方法 6

3 实验结果 8

3.1 蜂蜜中油菜花粉外源基因的检测 8

3.2 蜂蜜中外源蛋白的检测 9

4 讨论 10

结 论 12

参考文献 13

致 谢 14

1. 前言

蜂蜜是我国主要的出口农副产品之一，欧盟和日韩等国市场是我国蜂蜜的重要出口地^[1]。2011年下半年欧盟开始要求检测蜂蜜中的转基因成分^[2]，并于同年的9月，欧洲法院确认了对转基因蜂蜜的限制条件^[3]。对转基因产品所施行的限制条款有可能成为接着抗生素残留、农药残留问题之后新的技术障碍。以油菜蜜作为研究材料开展蜂蜜中转基因成分的检测研究工作，正是为了突破欧美国家可能设置的新的技术要求，在技术上做好应对准备^[4]。油菜作为主要的蜜源植物之一，转基因油菜大面积生产，其中抗除草剂油菜占很大比例。目前使用最多的一种抗除草剂基因是bar基因，其表达产物PAT蛋白能够使草胺膦的自由氨基乙酰化,而抑制草胺膦的活性,使草胺膦脱毒,从而使转bar基因的农作物具有抗除草剂的性状^[5]。转bar基因油菜具有抗除草剂草胺膦的生理功能，减少了农药的使用，对生态环境保护具有一定的积极作用，但其转基因成分有可能通过蜜蜂的觅食行为混入蜂蜜中，对食品安全产生影响。蜂蜜中是否因为它的蜜源植物是转基因作物，而含有转基因成分也受到广泛关注，所以有必要建立一种有用的蜂蜜中转基因成分检测的方法，确定在蜂蜜中是否含有转基因成分，以保障消费者的权利，并且促进蜂蜜进出口的稳定发展^[6]。

蜂蜜中成分比较多，不但含有多种糖，而且含有有机酸、酶以及来源于蜜蜂采集的固体颗粒物，如植物花粉等。蜂蜜本身并不含有植物DNA，但因为蜂蜜中经常掺入一定量的植物花粉，因此也有可能带有转基因成分^[7]。蜂蜜因含有蜜源植物花粉而成为与转基因植物相关的特殊的动物源产品。蜂蜜中的转基因花粉主要是来自于蜂群采集并储存在蜂房的花粉。另外一些蜂农为了获得具有不同的香型和风味的蜂蜜，人为地添加花粉。如果这些花粉来自于转基因作物，那么蜂蜜中就有可能含有转基因成分^[8]。因此，本实验为了检测蜂蜜中的转基因成分，首先需要从油菜蜜中提取出油菜花粉DNA；然后对蜂蜜中油菜花粉的DNA进行实时荧光定量PCR检测，以确认蜂蜜中是否混入转基因油菜花粉；最后利用bar蛋白检测试纸条分别对不破坏油菜花粉和除去油菜花粉的蜂蜜进行检测，观察并确认蜂蜜中是否表达出外源bar蛋白。

为了准确地评价转基因食品的安全性，对转基因食品进行标识管理，建立简单、快速、准确的方法检测其含有的转基因成分，是当前研究的热点问题。目前，转基因产品的检测方法主要有两种：一种是直接对外源基因进行检测，最常用的是以核酸为基础的PCR技术。近年来，具备PCR和杂交探针两者优点的实时荧光定量PCR技术发展非常迅速，检测灵敏度比常规PCR技术高100倍左右^[9,10]。通过分析PCR过程中荧光信号的实时变化，就可以得到样品中DNA模板含量的定量结果。运用实时荧光定量PCR方法检测外源基因，克服了传统的PCR方法一直面临的几个问题：一是不能准确定量；二是容易发生交叉污染，出现假阳性；三是普通PCR都是分析的最终产物。但是在大多情况下，人们感兴趣的是没有经过PCR 放大前的初始模板量，荧光定量 PCR 技术在这种情况下就应时而生了^[11]。荧光定量PCR技术自从产生以来，经过不断地发展和完善，到目前为止技术水平已经非常成熟。这项技术不但实现了对DNA模板的定量，而且具有实时性好、特异性好、可靠性好、灵敏度好、自动化水平高等优点。其标记方法也由起初的染料法发展到特异性更好的探针法。现在，实时荧光定量PCR检测技术已经普遍地运用到食品、生物、医学、农业等多个学科领域^[12]。对于转基因成分的检测，除了核酸检测外，还可通过另一种方法进行检测，即对转基因产物中的外源蛋白进行检测，如ELISA法、蛋白质印迹法和试纸条法等^[13]。在本实验中采用了bar蛋白检测试纸条法，该方法的主要原理是利用抗原抗体特异性反应，具有特异性强、操作快捷简便、灵敏度高等优点。

2 材料与方法

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