1．目的及意义
1、目的及意义
本研究通过构建多组氨酸标签的重组蛋白His-ChiCaSifi，优化其表达纯化条件，然后研究其诱导矿化性能。主要工作内容如下所示： ①提取pTWIN[ChiCaSifi]质粒，构建构建多组氨酸标签的重组蛋白His-ChiCaSifi，在原核细胞大肠杆菌体内诱导表达获得所需目的蛋白质。 ②探索不同诱导条件(温度、时间、IPTG 浓度等)，获得最优表达量。③摸索不同纯化工艺(纯化时间、温度、过柱方式、结合时间)，获得最大纯化量。④研究其诱导矿化性能。贝壳珍珠层一种天然的有机无机层状复合材料，其独特的多尺度组装结构赋予其优异的机械性能。珍珠层中无机相约占总重量的95%，剩余的有机相主要由三种生物大分子组成：不可溶的多糖几丁质、类似蚕丝蛋白结构的蛋白、富天冬氨酸等酸性氨基酸的可溶蛋白。重组蛋白ChiCaSifi，由几丁质结合区域、钙离子结合区域、蚕丝蛋白重复序列三段组成，其中几丁质结合区域来源于载体质粒PTWIN1上面的几丁质结合区域（chitin binding domain-CBD）。

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2. 研究的基本内容与方案

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2、研究（设计）的基本内容、目标、拟采用的技术方案及措施
实验的主要内容：
① 提取pTWIN[ChiCaSifi]质粒，构建构建多组氨酸标签的重组蛋白His-ChiCaSifi
② 在原核细胞大肠杆菌体内诱导表达获得所需目的蛋白质。

③ 探索不同诱导条件(温度、时间、IPTG 浓度等)，获得最优表达量。

④ 摸索不同纯化工艺(纯化时间、温度、过柱方式、结合时间)，获得最大纯化量。

⑤ 研究其诱导矿化性能。

技术方案：
1. 细菌培养复苏及冻存
①从-70℃冰箱里取出需要接种的菌种常温解冻，在净化工作台内开始操作。

用灭菌过的接种环放入菌种保存管，取出接种环放入5ml 含抗生素的LB液体培养基中。

将含有细菌的液体培养基放到摇床中37℃，220 rpm/min过夜培养。

②待细菌长好后将接种环放入菌液中，取出后在含抗生素的LB固体培养基上划线培养。

划线后的培养基倒置放入37℃恒温培养箱中过夜培养。

培养大约15-18h，次日观察，菌落长好后用封口膜封平板到冰箱4℃保存，可使用两周。