1. 研究目的与意义（文献综述）

土壤微生物多样性是指土壤微生物的种类和种间差异，是表征土壤生态系统群落结构和稳定性的重要参数之一。由于土壤微生物群落能较早地预测环境质量的变化，因而被认为是最有

潜力的敏感性生物指标之一。但由于土壤种类的多样性及其微生物的复杂性以及研究方法等因素的限制，土壤微生物多样性的研究远远落后于动植物。

21世纪以来,新一代高通量测序技术的发展日新月异,可直接测序16 s irna基因的pcr产物, 高通量测序技术（high-throughput sequencing）又称第二代测序技术（next-generationsequencing technology），具有高准确性、高通量、高灵敏度和低运行成本的特点，该测序技术已被应用于多种生态系统的微生物多样性研究，如土壤、海洋、肠道等，它可以同时完成传统基因组学研究（测序和注释）以及功能基因组学（基因功能等）的研究，是深入、细致地研究微生物群落结构的新手段。2007年年焦磷酸高通量测序技术首次应用于土壤微生物16 s irna基因遗传多样性研究,迄今在isi科学引文数据库已有500余篇土磷酸微生物相关论文报道。

2. 研究的基本内容与方案

基本内容：从土壤环境环境中获得菌群样品，提取菌群总dna，利用特异引物扩增16s rdna的特定序列，继而为高通量测序奠定基础。本研究将第二代高通量测序技术应用于土壤环境微生物多样性分析，利用测序平台对来自土壤环境的16s rdna样本进行分析，借助生物信息学的方法对大规模的序列数据进行统计，以得到更为全面和深入的土壤环境微生物多样性信息，为土壤环境微生物多样性提供更加详实和准确的背景资料，为保护土壤环境提供参考意见。

目标：提取某地的土壤环境样品，进行菌种的培养，合理地设计出特异引物，能够成功进行pcr扩增，并进行高通量测序。为土壤环境的保护提供精确全面的背景信息支持。

技术方案：

3. 研究计划与安排

[1] 第1周：了解论文题目，认识所需完成的主要内容和任务；搜集相关学术期刊、论文、文稿、专利、教材等资料，阅读后进行总结，对论题形成一个初步的系统性的认识。

[2] 第2-3 周：完成毕业论文开题报告，确定实验技术路线，确定具体的实验方案和步骤。

[3] 第4-8周：提取菌群总dna，利用特异引物扩增16srdna的特定序列。

4. 参考文献（12篇以上）

[1]徐瑛,孙永明,郑涛, 等.高通量测序技术辅助筛选脱硫菌[j].化工学报,2014,(5):1808-1814.

[2]毛伟华,吴三玲,张旭.土壤微生物16s rdna的ion torrentpgm高通量检测方法构建与应用[j].浙江农业学报,2015,(12):2165-2170.

[3] 樊奔.土壤宏基因组文库构建与土壤微生物群落结构指示方法的初步建立[d].南京农业大学,2003. doi:10.7666/d.y605151.