1. 研究目的与意义（文献综述）

研究背景：

21世纪以来工业迅速发展，但是随之而来的各种生活污水的处理不当及乱排乱放，导致中国滇池水体富营养化，使得滇池爆发了蓝藻水华。作为蓝藻水华中的优势群种，束丝藻能够在世界性富营养化的水体中迅速繁殖。束丝藻是能产生海产麻痹性贝类神经毒素即束丝藻毒素的有毒丝状蓝藻。束丝藻毒素是存在于海水中的甲藻，淡水中的蓝藻以及细菌里的生物碱性神经毒素。这种毒素毒性极强不仅中毒快而且危害极大，与其他神经毒素相比更严重的是这种毒素存在于淡水中，人们日常生活中必不可少的用到淡水。由于该毒素有较强的耐酸和耐高温性，普通的烹调方法不能完全去除其毒性，所以其可通过食物链的富集作用最终危害人类，同时人们日常饮水，沐浴及农田灌溉也会给该毒素进入人体的机会，对人体健康和生态环境产生严重危害。

早在20世纪初便有报道水华束丝藻产生毒素使牛中毒死亡的现象，但并没有实质性的研究进展。到20世纪60年代初，才深入的对束丝藻毒素进行研究。而中国对于束丝藻毒素研究的首次报道则是2004年刘永梅团队通过腹腔注射法检测到滇池水华产生的束丝藻毒素对小白鼠有毒害作用。因为斑马鱼是一种结构简单的脊椎动物，它与人类以及其他脊椎动物是同源的，而且斑马鱼的脑与人类和其他脊椎动物的脑也基本相似。所以斑马鱼被作为一种模式生物代替结构比较复杂的脊椎动物来研究。2007年，axel oberemm，berry john p等人发现淡水蓝藻水华通过直接释放毒素危害斑马鱼胚胎的发育。2013年，张德禄团队研究发现束丝藻毒素造成斑马鱼脑产生氧化应激引发脑细胞凋亡，之后发现束丝藻毒素抑制斑马鱼的传感和运动能力，使其形态改变。在最近的报道中提及，张德禄团队将斑马鱼肝脏暴露于半致死剂量的束丝藻毒素中，结果发现束丝藻毒素破坏了斑马鱼肝脏内的氧化还原平衡，诱导肝脏中出现了氧化应激和脂质过氧化，且肝脏内神经递质失活，传导功能异常，揭示了束丝藻毒素对斑马鱼肝脏的毒害机理。

2. 研究的基本内容与方案

本文以滇池水华期间（2009）采集分离的水华束丝藻为材料，藻株经实验室鉴定、分离、纯化、培养、细胞内毒素抽提和纯化，毒素含量和成分分析后，通过腹腔注射（5.3 and 7.61g stxeq/kgbw作为低浓度和高浓度）对斑马鱼进行毒素处理，在染毒后的24小时内的不同时间点（0,1,3,6,9,12 和 24h）取斑马鱼骨骼肌组织，对其camp反应元件结合蛋白（camp responseelement-binding protein，creb）、腺苷酸环化酶（adenylate cyclase，ac）、钙调蛋白激酶ii（camkii）、蛋白激酶c（pkc）、蛋白激酶a（pka）、蛋白磷酸酶、g蛋白偶联受体进行研究

研究目标：作为滇池水华优势种群，束丝藻产生的束丝藻毒素对斑马鱼肌肉收缩的环腺苷一磷酸信号分子的影响在水产养殖及动物保护领域有重要的指导作用。本实验在束丝藻毒素处理斑马鱼后的不同时间点内，运用酶联免疫吸附沉淀法，研究斑马鱼骨骼肌中的各种酶类在毒素处理一段时间后的活性变化，分析毒素对骨骼肌环腺苷一磷酸信号系统变化的影响。本研究旨在探索斑马鱼骨骼肌环腺苷一磷酸信号系统变化对该神经毒素的响应，以揭示束丝藻水华及其神经毒素的神经肌肉信号毒性，为水产养殖、野生动物保护及人类健康提供新的参考依据。

拟采用的技术方案：

3. 研究计划与安排

第1周：资料查找，筛选，阅读，讨论和立论;

第2周：研究思路和研究方法的设计；

第3周：筛选和选择（根据自身能力和实验室条件确定）和细化；

4. 参考文献（12篇以上）

[1]孙冬,姚长江.养血清脑颗粒对血管性认知功能障碍大鼠空间记忆能力和海马creb活性的影响.长江大学学报自然科学版:医学卷 , 2009 (4) :93-96

[2]肖佩芳, 柴忆欢 , 何军.环磷酸腺苷反应元件结合蛋白在儿童急性淋巴细胞白血病中表达的意义.中华实用儿科临床杂志 , 2008 , 23 (3) :200-202

[3]张小燕，吴鉴明，李振南.脑震荡大鼠海马ca1区p-creb的表达.实用临床医药杂志 , 2007 , 11 (5) :53-56