文 献 综 述

1.研究背景

据了解当前国内外使用的常规采油技术仅能采出油藏的30 %~40 %，采油技术的创新与发展依然迫在眉睫，提高原油采收率多年来受到全世界的关注和许多国家科研工作者的研究^[1]。目前微生物采油技术是提高采收率最具发展前景的一项采油技术，与常规采油技术相比，此项技术具有适应范围广、投资少、效率高、环保、工艺简单等优势^[2-4]。因此，开发能作用于任何复杂油藏环境的采油微生物并研究其相关的理化性质是当前研究的重要任务之一。

2.枯草芽孢杆菌的概述

枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种好氧型、有芽孢的杆状革兰氏阳性菌，简称枯草杆菌，是一种安全常用的菌种，其在自然界分布非常广泛，不会产生毒性物质，对人畜几乎无任何毒害作用，因此广受关注^[8]。其菌体细胞形态为杆状，具有内生的孢子，在生命活动过程中，可以产生多种抗菌素和一些相应的酶类等，因而其抗菌活性较强，抑制病原菌种类较多，加上芽孢的产生使其具有极强抗逆性能。生理特性表现为，营养需求简单，生长繁殖较快、因而在枯草芽孢杆菌的剂型加工、生产中表现为操作简便，存活率高^[9]。

枯草芽孢杆菌由于其分布广泛，容易分离与培养，且生理特征较有多样性，有广泛的应用前景以及重要的研究意义^[10]。该菌耐高温，可以以不同类型原油为唯一碳源、能够生长、降粘、产表面活性物质、对原油和液蜡有较好的乳化和分散作用，它的使用可提高原油采收率，同时其本身存活不难，具有较强的耐高温、耐高矿化度、耐酸的能力,能够应用的环境范围广。在高温高盐的油田地层中发现的芽孢杆菌组成丰富，且耐盐性很好,具有很好的微生物采油研究价值。

3.影响枯草芽孢杆菌稳定性的因素

3.1温度

对于枯草芽孢杆菌来说，适宜的温度是 30~45 ℃。培养温度随菌种、培养基成分和细胞生长阶段的不同而不同，温度不仅影响发酵液的理化性质，还对外源蛋白的表达和活性有很大的影响。温度主要通过改变酶反应速率来影响菌体的储藏。一般情况下，培养基温度升高，酶反应速率增大，生长代谢加快，生产期提前。但是酶很容易因为过热而失去活性，表现为菌体容易衰老，影响最终产量^[11]。

在对枯草芽孢杆菌的培养中，其他培养条件保持一致，当温度低于20 ℃时，菌的生长会受到抑制，在25~30 ℃此范围内随着温度的升高，菌的迟缓期会明显缩短^[12]。而基于在不同培养温度下培养枯草芽孢杆菌实验, 37 ℃和42 ℃处理接种后5小时菌量迅速增加, 进入指数生长期, 而32 ℃处理接种后12小时进入指数生长期，说明其随温度升高生长延滞期明显缩短，且最大菌量在37 ℃时实现^[13]。已有的研究表明，枯草芽孢杆菌都有其自身特定的最适温度区间，当温度低于或高于该区间，储藏稳定性都会受到抑制。

3.2 pH值