深海嗜热细菌Flammeovirga sp. NJ-04中内切褐藻胶裂解酶FsAlgA的重组表达、纯化与酶学性质研究开题报告
2020-06-03 21:53:09
1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)
褐藻胶是一种由 l-古罗糖醛酸和其 c5 差向异构体 d-甘露糖醛酸结合而成的线性高分子多糖。褐藻胶裂解 酶能够通过 β 消去机制催化褐藻胶降解产生具有多种生物活性的褐藻胶寡糖。对于酶的鉴定分析将会拓展酶和寡糖 在食品、农业等领域的应用范围。褐藻胶来源丰富,以其螯合金属离子、溶液高黏性、凝胶性等特点被广泛用于食品、纺织、印染、医疗、化工等行业。研究证明褐藻胶寡糖具有抗癌、抗肿瘤、促进植物生长等多种生理功能。褐藻胶裂解酶作为生产褐藻胶寡糖的工具酶,反应效率高,反应条件温和,可控性强,便于定向制备褐藻胶寡糖,其研究具有深远理论意义和应用前景。[1]
dna的重组表达是指在合适表达元件(如转录启动子,终止子,翻译调控序列,转录酶,翻译因子等)调控下,目的基因表达成目的蛋白质的技术。
重组蛋白质的纯化是指通过离子交换,凝胶过滤,疏水反相,亲和等方法除去大量杂志,如其他蛋白,核酸,内毒素和病毒等,澄清,浓缩和稳定目标蛋白。
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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
dna片段的扩增,拟采用pcr技术来解决;
dna片段的测序以及连接转化;
重组蛋白质的纯化,拟采用离子交换,凝胶过滤,疏水反相,亲和等方法;
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