深海嗜热细菌Flammeovirga sp. NJ-04中内切褐藻胶裂解酶FsAlgA的重组表达、纯化与酶学性质研究文献综述
2020-06-03 21:53:22
褐藻胶是一种由 L-古罗糖醛酸和其 C5 差向异构体 D-甘露糖醛酸结合而成的线性高分子多糖。褐藻胶裂解 酶能够通过 β 消去机制催化褐藻胶降解产生具有多种生物活性的褐藻胶寡糖。对于酶的鉴定分析将会拓展酶和寡糖 在食品、农业等领域的应用范围。褐藻胶来源丰富,以其螯合金属离子、溶液高黏性、凝胶性等特点被广泛用于食品、纺织、印染、医疗、化工等行业。研究证明褐藻胶寡糖具有抗癌、抗肿瘤、促进植物生长等多种生理功能。褐藻胶裂解酶作为生产褐藻胶寡糖的工具酶,反应效率高,反应条件温和,可控性强,便于定向制备褐藻胶寡糖,其研究具有深远理论意义和应用前景。[1]
DNA的重组表达是指在合适表达元件(如转录启动子,终止子,翻译调控序列,转录酶,翻译因子等)调控下,目的基因表达成目的蛋白质的技术。
重组蛋白质的纯化是指通过离子交换,凝胶过滤,疏水反相,亲和等方法除去大量杂志,如其他蛋白,核酸,内毒素和病毒等,澄清,浓缩和稳定目标蛋白。
酶学性质研究是指对蛋白的最适温度,最适ph,温度稳定性,ph稳定性,底物谱,底物抑制类型,辅酶,辅基,反应机制,稳态动力学以及快速动力学进行研究。
本实验采用PCR技术对DNA片段进行扩增,从而测序。PCR(生物学的聚合酶链式反应)一般指聚合酶链式反应,是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。
利用DNA在意外摄氏95度高温时变形会变成单链,低温时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度,DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变性温度,复性温度,延伸温度之间很好地进行控制。
参考文献
[1]陈俊帆,石波.褐藻胶裂解酶的研究进展[J].食品工业科技.2011年第08期
[2]侯艳平.Flammeovirga pacifica WPAGAI中琼胶酶基因的克隆表达,酶学性质分析及讲解产物的初步研究[J].国家海洋局第三海洋研究所.2015年6月
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