1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

文献综述

1.1 我国鲜、冻水产品市场现状

1.1.1 我国水产品消费现状

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

2.1研究的内容

（1）市场采集的共54份鲜、冻水产品的DNA提取

（2）通用引物扩增COI条形码

（3）序列分析与物种鉴定

2.2主要的研究手段

（1）DNA的提取如下；

DNA的提取操作过程如下：取约200mg肌肉组织于2ml圆底离心管中，加入200micro;l 组织裂解液（500 mM Tris-HCl pH 8.0, 100 mM EDTA, 100 mM NaCl, 2% SDS）和200micro;l磷酸盐缓冲液（300 mM pH 8.0），用无菌手术剪刀将肌肉组织剪碎。再向该离心管中加入20micro;l蛋白酶K（20mg/ml），并将离心管置于65℃恒温水浴锅裂解60min。裂解结束后，14000g离心5min，吸取上清液并转入新的2ml圆底离心管。加入0.5倍体积的乙酸钠溶液（4M, pH 8.0），振荡混匀，14000g离心5min，吸取上清液并转入新的2ml圆底离心管。再加入0.5倍体积的乙酸钠溶液，振荡混匀，14000g离心5min，吸取上清液并转入新的1.5ml尖底离心管。加入0.6倍体积的异丙醇，振荡混匀，静置5min后14000g离心10min，弃去上清液。加入800micro;l 70% 乙醇，振荡混匀，14000g离心3min。弃去上清液，再加入800micro;l 100%乙醇，振荡混匀，14000g离心3min，弃去上清。75℃烘箱烘干后加入30micro;l 灭菌超纯水溶解DNA，并置于-20℃贮藏。DNA的浓度和纯度（A260nm/A230nm和A260nm/A280nm）用核酸蛋白测定仪测定，并稀释至100ng/micro;l备用。DNA的完整性通过1%琼脂糖凝胶电泳检测。

（2）COI条形码的扩增（表1）；

表1 COI条形码通用引物序列

（3）采用Mega 5.0对序列进行分析