1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

文 献 综 述

前言

褐藻胶是含量最丰富的海洋多糖，约占海藻多糖含量的三分之一。褐藻寡糖具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎症等多种生物学活性。因此褐藻胶裂解酶的发掘及降解机制的研究具有重要意义。前期研究发现海洋弧菌中具有高效、独特的褐藻胶利用系统。本研究围绕新型的褐藻胶裂解酶系的发掘开展研究，基于基因组学发掘了vibrio sp. ou02 相关基因簇上的褐藻胶裂解酶系，发现了8个预测的褐藻胶裂解酶。结合转录组和qrt-pcr，发现了其中关键的褐藻胶裂解酶alyb-4888，vibrio sp.ou02 经褐藻胶诱导，alyb-4888 的编码基因表达量最显著，说明alyb-4888 在褐藻胶的讲解中具有重要作用。序列对比发现，alyb-4888 的n-末端具有32家族的碳水化合物结合模块（cbm32），c-末端具有属于pl7家族的褐藻胶裂解酶催化结构域。在此基础上分析了褐藻胶裂解酶alyb-4888的三维结构，这是首个解析的褐藻胶裂解酶催化区（pl7）域cbm32全长的结构（pbd：5wvv）。结合突变技术，研究了n-末端及其linker影响alyb-4888的催化活性和产物分布的独特机制。综上所述，综合运用多种组学技术，首次系统研究了弧菌中独特高效的褐藻胶利用系统。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

新型褐藻胶裂解酶的重组表达及其利用价值：

dna片段的扩增，拟采用pcr技术来解决；

重组蛋白质的纯化，拟采用离子交换，凝胶过滤，疏水反相，亲和等方法。