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摘 要

黄曲霉毒素广泛存在于发霉的粮食、油料等食品中，是一类黄曲霉类真菌产生的次级代谢产物。其中，黄曲霉毒素M₁有剧毒，会对我们的身体造成非常严重的伤害，其主要是由黄曲霉毒素B₁在动物体内羟基化而产生。因此对其进行检测尤为重要。传统的检测技术因需要价值高昂的设备、相关的专业人员、操作繁琐等各种原因，不能很好地满足实际检测中的需求。而近几年核酸适配体传感技术因其能够低成本、简便和快速地检测黄曲霉毒素M₁，而逐渐成为研究的热点。本实验所采用是核酸适配体传感—荧光分析法，其是利用适配体与氧化石墨烯构建荧光生物传感器用于黄曲霉毒素M₁的检测，并运用于实际牛奶样品的检测，从而建立出一种快速检测黄曲霉毒素M₁的生物传感技术。

关键词：核酸适配体 黄曲霉毒素M₁ 荧光分析 牛奶

Abstract

Aflatoxin is generally exists in moldy food, oil and other raw materials. It is a secondary metabolite generated by a class of aflatoxins. Among them, aflatoxin M1 is highly toxic and will cause very serious damage to our body. It is mainly generated by the hydroxylation of aflatoxin B1 in animals. Therefore, it is particularly important to detect it. So it is particularly important to detect aflatoxin M₁. Because of the high value equipment, related professionals, cumbersome operation and other reasons, the traditional detection technology can not meet the requirements of practical detection well. But, recently, aptamer sensing technology has researched by more and more scholars, because it can detect aflatoxin M₁ easily and quickly and low-cost. In this experiment, we adpoted the aptamer sensing technology and fluorescence analysis method. In this method, the sensor was formed by aptamer and graphene oxide for aflatoxin M₁ detection, and it was applied to the detection of actual milk samples, so as to establish a biosensor technology for the rapid detection of aflatoxin M₁.

Keywords: Aptamer; Aflatoxin M_1; Fluorescence analysis; Milk

目 录

摘要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1 引言 1

1.2 牛奶污染黄曲霉毒素M₁的危害 1

1.3 传统的AFM₁的检测方法 2

1.3.1 高效液相色谱法（HPLC） 2

1.3.2 薄层色谱分析法（TLC） 3

1.3.3 酶联免疫吸附法（ELISA） 4

1.3.4 免疫亲和柱-荧光光度法 4

1.4 核酸适配体及核酸适配体生物传感器 5

1.4.1 核酸适配体 5

1.4.2 核酸适配体生物传感器 5

1.5 本课题研究的内容与意义 7

第二章 核酸适配体生物传感技术分析牛奶中黄曲霉毒素M₁ 8

2.1 引言 8

2.2 实验部分 8

2.2.1 实验仪器与试剂 8

2.2.2 前处理 9

2.3 实验步骤 10

2.3.1 仪器参数的设定 10

2.3.2 可行性实验 10

2.3.3 检测体系的优化 10

2.3.4 AFM₁分析实验 10

2.3.5 特异性分析实验 11

2.3.6 实际牛奶样品的添加回收实验 11

2.4 结果与讨论 11

2.4.1 反应机理研究 11

2.4.2 可行性实验 12

2.4.3 检测体系的优化 13

2.4.4 AFM₁分析实验 14

2.4.5 特异性分析实验 15

2.4.6 实际牛奶样品的添加回收实验 16

2.5 小结 16

第三章 结论与展望 17

3.1 结论 17

3.2 展望 17

参考文献 19

致谢 22

文献综述

引言

随着居民生活水平的改善和提高，在饮食方面人们有了更高的追求，乳及乳制品成为了人们的选择，其也成为了我们重要的营养物质来源。在保证营养的同时，人们对牛奶的品质也有了更高的要求，因为牛奶品质的好坏，直接影响着人们的身体健康。而牛奶品质的好坏与其是否受到黄曲霉毒素的污染有着密切的关联，因喂养奶牛的牧草和饲料易在受到该毒素的污染，进而会使乳汁被污染。我们知道黄曲霉毒素具有剧毒，即使是误食的量小，也会严重损害我们的健康^[1]。当牛奶受该毒素污染时，牛奶的质量就会降低，从而引发一系列的安全问题。2012年发生的黄曲霉毒素牛奶事件，更是将牛奶的安全问题抛到了大众的眼前，使企业和国家不得不下大力气对黄曲霉毒素污染问题进行严格的把控治理。

要想有效地控制住牛奶中的黄曲霉毒素污染问题，我们就得选择合适、有效的检测方法进行分析检测。本文以黄曲霉毒素M₁（AFM₁）为案例，探讨了部分相关的检测方法。常用的传统检测方法有高效液相色谱和薄层色谱分析法、酶联免疫吸附法、免疫亲和柱-荧光光度法等^[2]。这几种方法虽然能够在实验中进行检测，但因其需要价值高昂的设备、相关的专业人员、操作繁琐等各种原因，不能很好地满足实际检测中的大批量、快速检测的需求。而近几年核酸适配体传感技术因其能够低成本、简便、大批量和快速地检测AFM₁，所以逐渐成为了食品中AFM₁的检测的研究热点。本实验中对牛奶样品进行的检测所采用亦是核酸适配体传感—荧光分析法。

牛奶污染黄曲霉毒素M₁的危害

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