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摘 要

基于形态结构无法鉴定市售商品中沙丁鱼（Sardina pilchardus）品种的真实性，本课题建立了沙丁鱼的SYBR Green实时荧光PCR鉴定方法。运用建立的SYBR Green实时荧光PCR方法对12种市售沙丁鱼制品进行鉴定。

结果发现，在所建立的方法下，3种非沙丁鱼品种均无荧光信号检出；通过对目标品种的基因组DNA进行稀释，结果显示这种检测方法可以用于检测0.24ng/μl以上浓度的沙丁鱼DNA。使用建立的方法对12份市售沙丁鱼制品样品进行检测，这12种样品均未出现扩增曲线。

该检测方法通用性强，灵敏度高，可以有效鉴定市售食品中沙丁鱼制品的真实性。本课题的实施可为政府监管部门监管鱼类市场提供帮助，起到维护消费者健康和权益的作用。

关键词：沙丁鱼 荧光PCR 引物 真实性

Study on species identification method of Sardina pilchardus based on fluorescence PCR

Abstract

Based on the fact that the morphological structure could not identify the authenticity of Sardina pilchardus varieties in commercial commodities, the SYBR Green real-time fluorescence PCR identification method for Sardina pilchardus was established in this study. The SYBR Green real-time PCR method was used to identify 12 kinds of sardine products.

The experiment revealed that no fluorescence signal was detected among the three non-sardine species. The results showed that the detection limit of this method was 0.24 ng/ l or above for sardine DNA. The established method was used to detect 12 samples of commercial sardine products, all of which showed no amplification curve.

This method has high unoversality and sensitivity. It can be used to identify the authenticity of sardine products in food. The implementation of this subject can provide help for the government regulatory authorities to supervise the fish market and play a role in safeguarding the health and rights and interests of consumers.

Key Words: Sardina pilchardus real-time PCR primer authentication

目录

第一章 文献综述 1

1.1沙丁鱼的概述 1

1.1.1沙丁鱼的同名异物 1

1.1.2 Sardina pilchardus的概述 1

1.1.3 Sardina pilchardus的营养价值 2

1.1.4 Sardina pilchardus的生态价值 2

1.1.5 Sardina pilchardus的经济价值 2

1.2沙丁鱼品种掺假 2

1.2.1水产品品种掺假 2

1.2.2 Sardina pilchardus的掺假现状 3

1.3基于DNA的分子生物学方法 4

1.3.1 DNA检测分子检测 4

1.3.2 DNA 条形码技术 4

1.3.3荧光PCR 5

1.4目的与意义 6

第二章 实验材料与方法 7

2.1 样品采集 7

2.2主要仪器与试剂 7

2.3实验方法 8

2.3.1 DNA提取 8

2.3.2引物设计 9

2.3.3 PCR扩增 9

2.3.4引物的特异性验证 9

2.3.6引物的灵敏度检测 9

2.3.7 市场售卖样品的检测 10

第三章 实验结果与讨论 11

3.1 DNA质量分析 11

3.2引物的设计筛选 11

3.2 引物特异性的验证 12

3.3引物灵敏度检测 12

3.4市场售卖样品的检测 13

第四章 结论与展望 15

4.1结论 15

4.2展望 15

参考文献 16

致 谢 19

第一章 文献综述

1.1沙丁鱼的概述

1.1.1沙丁鱼的同名异物

沙丁鱼（Sardine）是硬骨鱼纲（Osteichthyes）鲱形目（Clupeiformes）一大类食用鱼类的统称。主要分布于欧洲沿海，非洲西北岸和地中海。我国也有丰富的沙丁鱼资源，大多分布于东南海岸，其中以拟沙鱼属中的远东拟沙丁鱼（Sardina melamosticta）为主。这种沙丁鱼适应广东地区的气候，一般以浮游生物、硅藻等为食，是广东地区重要的海洋经济鱼类之一^[1]。根据国际食品法典委员会订立的国际食品标准，世界上共有二十一种鱼类可以称作沙丁鱼^[2]，分别是：

Sardina pilchardus

Sardinops melanostictus,；S. neopilchardus,；S. ocellatus,；S. sagax,；S. caeruleus,

Sardinella aurita,；S. brasiliensis,；S. maderensis,；S. longiceps,；S. gibbosa

Clupea harengus

Clupea bentincki

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