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摘 要

微生物群体感应机制可以协调细菌之间的共生、竞争、细菌毒性、菌体密度、抗生素的产生、运动性、生物膜的形成等。有关驱油微生物琼氏不动杆菌5-6的群体感应现象报道较少。为了探究琼氏不动杆菌5-6是否受到群体感应系统的控制，进而考虑利用化学信号分子调节菌体浓度，达到高密度培养的目的。目前，利用哈氏弧菌的荧光反应对其他微生物在生长过程中是否产生AI-2信号分子以成为一种便捷的通用方法。本文利用生物传感菌的生物学方法，哈氏弧菌荧光显色的原理，检测琼氏不动杆菌5-6群体感应信号分子。结果表明：该菌存在AI-2系统调控的群体感应现象，适当的调控该信号分子的分泌，有利于进一步提高琼氏不动杆菌的浓度。

关键词: 琼氏不动杆菌、AI-2信号分子、群体感应调控机制

Studies on signal of quorum sensing by Acinetobacter junii 5-6

ABSTRACT

Sensing mechanism of microbial populations can coordinate symbiosis between bacteria, competition, bacterial toxicity, cell density, antibiotic production, motility, biofilm formation . Currently, about bacterial quorum sensing phenomenon had a lot of relevant reports, such as Bacillus subtilis application field of the environment, regulation of antibiotic-producing Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli spectrum antibiotic generation plants for corrosion capacity Carotovora breeding applications. Flooding related microbes Acinetobacter junii 5-6 quorum sensing phenomenon rarely reported. To explore Acinetobacter junii 5-6 was subject to control quorum sensing system, and then consider the use of chemical signaling molecules regulating cell concentration to achieve the purpose of high-density culture. Currently, the use of fluorescence Vibrio harvi response to other microorganisms in the growth process was to produce AI-2 signaling molecule in order to become a convenient general method. In this paper, the use of biological methods biosensor bacteria Vibrio harvi principle fluorescent-colored, tested Acinetobacter junii 5-6 whether to generate quorum sensing signal molecules.

Key words: Acinetobacter junii; AI-2 ; Quorum sensing regulation mechanism

目 录

摘 要 I

ABSTRACT II

第一章 文献综述 1

1.1 研究背景 1

1.2琼氏不动杆菌 1

1.2.1.琼氏不动杆菌的特性 1

1.2.2琼氏不动杆菌的应用 1

1.3群体感应现象 3

1.4群体感应现象对菌体生理特性的调控 3

1.5群体感应因子检测方法 4

1.6琼氏不动杆菌群体感应现象研究现状 4

1.7研究目的及意义 4

第二章 实验材料与方法 6

2.1 实验材料 6

2.1.1 菌株 6

2.1.2 试剂 6

2.1.3 仪器 6

2.1.4培养基 6

2.1.5测定方法 7

2.2实验方法 7

2.2.1 琼氏不动杆菌5-6的活化及种子液的制备 7

2.2.2 哈氏弧菌种子液及稀释液的制备 7

2.2.3 不同培养上清的制备 7

2.2.4 初步探究琼氏不动杆菌5-6是否产生AI-2信号因子 8

2.2.5 信号分子的分泌量随菌体生长变化情况 8

2.2.6 信号分子对琼氏不动杆菌5-6生长的影响 8

第三章 结果与讨论 9

3.1 琼氏不动杆菌是否分泌群体感应因子AI-2 9

3.2信号分子AI-2随琼氏不动杆菌菌种密度的变化 11

3.3 同比例加入不同琼氏不动杆菌滤液对菌体浓度的影响 11

3.4 琼氏不动杆菌5-6上清液对菌体生长的影响 12

3.5不同时间加入琼氏不动杆菌5-6上清液对菌体生长的影响 13

3.6发酵罐小试 13

第四章结论与展望 15

4.1结论 15

4.2展望 15

参考文献 16

致 谢 19

文献综述

1.1 研究背景

石油开采只占原油的70%―80%，如如何提升石油开采技术一直是全世界研究的重要问题^[1]，而生物技术特别是微生物采油技术是继热力驱、化学驱、聚合物驱等传统方法之后的一种高效率高水平的综合性采油技术^[2]。但微生物采油技术中微生物必须具有高密度，高活性等特点，琼氏不动杆菌^[3]是驱油微生物中一种重要的本源微生物。

微生物采油技术面临的难题是无论如何调节培养基成分和发酵技术，菌体生长到一定程度，均会出现一定的自溶、消亡，目标产物产量也会降低^[4]。目前研究发现一种新的菌体生长调控机制，群体感应调控机制。枯草芽孢杆菌的环境领域应用、铜绿假单胞菌生产抗生素的调节、大肠杆菌光谱抗生素的产生、软腐病菌对抗腐能力的植株的选育等应用都是依据群体感应机制，目前关于琼氏不动杆菌是否存在群体感应现象，受到群体感应系统的控制，而影响了其菌体的生长的研究还没有报道，而这种机制对于调节高密度培养过程有很大的帮助，所以需要研究是否存在群体感应机制。

1.2琼氏不动杆菌

1.2.1.琼氏不动杆菌的特性

琼氏不动杆菌（Acinetobacter junii）属于不动杆菌属^[5]，是一种非发酵菌，在营养琼之上生长，菌落表面光滑透明、边缘整齐。液体培养基中呈扩散性混浊，革兰氏阴性杆状菌。厌氧条件下能生长，为兼性厌氧菌。最适生长温度为35℃，有的42℃也能生长。能在麦康凯琼脂培养基上生长，但在SS琼脂培养基上只有部分菌株生长。菌体大小为1.5～2.5μm，长成双排列，革兰染色不易褪色，多数菌株有荚膜，无芽孢，无鞭毛。同时也是一种条件致病的细菌，该菌可引起呼吸道感染、败血症、肺炎、伤口及皮肤感染、泌尿生殖道感染等疾病^[6]，重症者可导致死亡，多见于老年和婴幼儿。琼氏不动杆菌分布也比较广泛，喜潮湿环境，主要分布于水体和土壤，人体皮肤、粘膜也多有存在。

1.2.2琼氏不动杆菌的应用

琼氏不动杆菌作为一种人体主要机会病原菌，且广泛的分布在人类生活环境中，目前主要对其进行医学方面的研究，比如不动杆菌属耐药机制^[7]的探究、抗生素药物的研发^[8]、败血症引起菌的分离筛选^[9]、产胞外多糖菌的免疫学研究^[10]等，同时还发现其在环境、资源等领域有较好的应用前景。

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