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摘 要

本实验以栀子苷为底物，β-葡萄糖苷酶为催化剂，从10种有机溶剂中选择酶能稳定存在的水-有机体系，测定了β-葡萄糖苷酶稳定性以及栀子苷在正辛醇-水和正己醇-水体系中的分配系数，分别在水、正辛醇-水和正己醇-水体系中进行栀子苷水解制备京尼平的反应，并研究栀子蓝色素反萃制备的条件。

研究结果表明：β-葡萄糖苷酶在正辛醇-水和正己醇-水体系中能够更好地保持酶活（均为88.2%左右），且热稳定性较好，确定了制备京尼平的体系为正辛醇-水体系，反应温度为55℃；栀子蓝反萃制备实验中，甘氨酸和精氨酸最佳pH分别为5.0和9.0。

关键词：栀子苷 京尼平 β-葡萄糖苷酶 相转移催化 反萃

Improving the Genipin preparation with Phase Transfer Catalysis and Gardenia Blue Pigment prepared with stripping preparation

Abstract

In this experiment, we use gardenoside as substrate and β-glucosidase enzyme as catalyst, Selecting 10 kinds of organic solvents to formulate water - organic system, and determined the stability of β-glucosidase in the two-phase system respectively. The partition coefficients of gardenoside in the systems of octanol-water and hexanol-water were probed. In addition, the preparation of genipin was carried out in the system of water, octanol-water and hexanol-water respectively. We also studied the conditions of stripping preparation to get gardenia blue pigment.

The result has showed that the β-glucosidase enzyme is more active in octanol-water and hexanol-water systems (for about 88.2%) and has better thermo stability. Therefore, the reaction of preparing genipin is performed in octanol-water system, and the temperature was 55℃. In the stripping preparation of gardenia blue pigment, the optimal pH of glycine and arginine were 5 and 9 respectively.

Key Words: Gardenoside; Genipin; β-glucosidase enzyme; Phase Transfer Catalysis; Stripping

目 录

摘 要 I

Abstract II

前 言 1

第一章 文献综述 2

1.1 栀子蓝色素 2

1.2 京尼平 3

1.3 京尼平的制备方法 3

1.3.1直接提取法 3

1.3.2 生物发酵法 3

1.4 相转移催化技术 4

1.5 研究的目的和意义 5

第二章 实验材料与方法 6

2.1 主要实验试剂 6

2.2 主要实验设备 7

2.3 HPLC分析条件的确定 7

2.4 京尼平标准曲线的绘制 7

2.5 栀子苷标准曲线的绘制 8

2.6 相转移催化生物制备京尼平 8

2.6.1 β-葡萄糖苷酶酶活测定方法 8

2.6.2 京尼平对栀子苷水解反应的影响 9

2.6.3 有机相-水相体系的选择 9

2.6.4 两相体系中β-葡萄糖苷酶催化制备京尼平 9

2.6.5 底物浓度对京尼平得率的影响 10

第三章 实验结果与讨论 12

3.1 京尼平和栀子苷检测波长的确定 12

3.2 京尼平标准曲线 12

3.3 栀子苷标准曲线 14

3.4 β-葡萄糖苷酶酶活测定 15

3.4.1 pNP标准曲线绘制 15

3.5 京尼平对栀子苷水解反应的影响 16

3.6 有机相-水相体系的选择 17

3.7 两相体系中β-葡萄糖苷酶催化制备京尼平 19

3.8 底物浓度对相转移催化的影响 22

3.9 栀子蓝色素的反萃制备 23

3.9.1 栀子蓝反萃pH的选择 23

3.9.2 栀子蓝反萃底物浓度的选择 24

3.9.3 栀子蓝反萃温度优化 25

第四章 结论与展望 26

4.1 结论 26

4.2 展望 26

参考文献 27

致 谢 29

前 言

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