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摘 要

DNA条形码技术为已经被广泛用于虾蟹品种掺假鉴定。食品加工中的复杂条件很容易造成DNA降解，使得获取标准DNA条形码（约650bp）变的非常困难。因此，非常有必要建立微型DNA条形码技术用于食品中虾蟹品种的掺假检测。本课题采用通用引物对从我国市场采集的25种常见虾蟹品种进行扩增、测序，并进行序列分析。

结果表明，采用蛋白酶K方法可以成功从所有样品中获取高质量DNA。所有样品均可以成功扩增约116bp的微型DNA条形码片段。测序获得序列长度在65-85bp，无法满足物种准确鉴定的要求。溶解曲线分析可以区分不同的虾蟹品种。

本课题的开展可为我国水产品市场监管提供理论依据。本课题的实施可以为政府相关监管部门准确鉴定市场虾类品种提供准确的途径，起到规范我国水产品市场和保护消费者权益的作用。

关键字： 微型条形码 COI基因 物种鉴定 PCR

Application of mini COI barcode in identification of common shrimp varieties in China's market

ABSTRACT

DNA barcode technology has been widely used in the identification of shrimp and crab varieties adulteration. The complex conditions in food processing can easily lead to DNA degradation, making it difficult to obtain standard DNA barcodes (about 650bp). Therefore, it is very necessary to establish micro DNA barcode technology for adulteration detection of shrimp and crab varieties in food. In this project, 25 kinds of common shrimp and crab varieties collected from Chinese market were amplified, sequenced and analyzed by universal primers.

The results showed that high quality DNA was successfully obtained from all samples by protease K method. All samples can be successfully amplified about 116bp of miniature DNA barcode fragments. The sequence length obtained by sequencing was 65-85bp, which could not meet the requirement of accurate identification of species. Dissolution curve analysis can distinguish different species of shrimp and crab. The development of this topic can provide theoretical basis for the regulation of aquatic products market in China.

Key words: Mini-Barcode COI Gene Species-identification PCR

摘要 I

ABSTRACT II

第一部分 文献综述 1

1.1 我国虾类产品市场现状 1

1.1.1 虾类简介 1

1.1.2世界虾类的产量及虾类产品贸易 1

1.1.3 虾的营养价值 2

1.1.4 虾类产品的掺假 3

1.2 可用于虾类品种鉴定的技术 4

1.2.1 基于形态学的技术 4

1.2.2 基于DNA的技术 4

1.3 本项研究目的及意义 6

第二章 材料与方法 7

2.1 样品采集 7

2.2 主要仪器 10

2.3 试剂 10

2.3 实验方法 10

2.3.1 DNA提取 10

2.3.2 浓度测定 11

2.3.3 PCR扩增及测序 11

2.3.4 序列比对与分析 12

3.1 DNA提取 13

3.2 PCR扩增 15

3.3测序 16

3.4荧光PCR 17

第四章 结果与展望 18

4.1中国市场常见虾类的鉴别 18

4.2生产加工对DNA提取的影响 19

4.3展望 19

参考文献 21

致谢 23

第一部分 文献综述

1.1 我国虾类产品市场现状

1.1.1 虾类简介

我们把生活在水中的一类节肢动物称之为虾，虾是属于节肢动物甲壳类，种类繁多，包括对虾、明虾、虎头虾、刀额新对虾等，一般生活在浅海海域、河流和湖海等。虾类以及虾类的食品都是有很高的营养价值的，因为虾肉十分鲜嫩，所以在烹饪方法上的选择十分丰富多样，简单的蒸煮就可以激发出其鲜美的味道。虾类的腹部十分发达一般是由七节构成的，扇尾是由尾节和尾肢共同构成，能够很好的在水中平衡游行。

1.1.2世界虾类的产量及虾类产品贸易

虾的品种分类还是很多的，在众多的经济水产品中有很大的份额。联合国粮农组织(FAO)在过往的研究报告中指出，虾类是一种非常具有市场潜力或者说是商业价值的产品，而且它的种类十分繁多，达到了300种以上。在这300种具有商业价值的虾类中，有30%是我们日常市场流通中的主要产品。全世界虾类产值(野生捕捞量和养殖量)每年超过了600万吨，其中约60%的虾产量来自捕捞，其他剩余部分的都是来自于养殖^[1]

世界捕捞虾产量每年约350万吨，亚洲是捕捞虾最重要的地区，其中，中国2000年-2005年平均年产量达120万吨，是世界最重要的虾产品生产大国，占世界总捕捞量的1/3^[2]。通常情况下，会有很多种计算虾类产品产量的方式方法，在以重量为一个衡量指数的标准下，下面几种的虾类的产量是占到全球每年虾类总产值的80%以上的，在这几种虾类中最为重要的一种是产自于日本北海道地区的，被当地人称之为毛虾的一种虾，他的产量可能达到了将近70万吨，是全球最重要也是产值最大的经济类虾类。并且根据相关数据的显示和推断，这一产值及其增长速度都在不断地增长，在未来的五到十年可能会突破100万吨，这也侧面体现除了水产品虾类产品的需求量的增长速度之快。

虾的营养价值真的是我们日常生活中少见的，而且味道也是鲜嫩可口，非常的符合人们的消费需求。在参与国际贸易流通的很多水产品之中，最为火爆的产品就是虾类的产品，还有很多以前不参加国际贸易的国家也通过虾类的贸易打开了自己国家国际贸易的通道，加入并成为进出口国。1996年开始，之后的十年里，世界虾类产品的出口量赠长了一倍，产值也增长了一半之多，占水产品份额的1/5以上。

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