菊花的酚类成分的鉴别

作者：Long-Ze Lin * , James M. Harnly

食品成分和方法开发实验室，贝尔茨维尔人类营养研究中心，农业研究服务部，美国农业部，美国马里兰州贝茨维尔市，BARC-East，巴尔的摩大道10300号。

摘要：一种基于液相色谱-二极管阵列和电喷雾离子的标准化分析方法。采用质谱/质谱法(lc - dade - esi /MS)鉴定46种黄酮类化合物和17种咖啡酸。菊花水甲醇提取物(菊花)(菊科)，一种重要的中草药。15种含咖啡因的奎宁酸和15种黄酮类化合物为正。确定的和其余的化合物暂时确定。检测到的酚醛树脂为pres-浓度大于0.001%的干燥植物材料。这些酚醛树脂中有许多是。报告对人体健康有好处。25种化合物，包括c -糖基化黄酮类化合物。含脂肪酸的咖啡酸，首次在菊花中报道，并对中药黄花的酚类成分进行了全面的分析。对该药草及其制品的质量控制，并了解其用法和功能。

1. 介绍

菊花在中国被称为“菊欢”，是一种重要的传统中药（TCM），用于“散寒”，“清热解毒”和“美白眼睛“，并被用作许多中药配方中的重要成分。 这种ower也被广泛用作食品补充剂或药草茶，被许多消费者认为是保健食品（楚，傅，关，叶， 2004; Lai，Lim，Su，Shen，＆Ong，2007）。 菊花含有显着量的类黄酮和被认为是生物活性组分的羟基肉桂酰奎尼酸（Beninger等人，2004; Chen，Li，Lu，Jiang，＆Zeng，2007; Clifford，Wu，Kirkpatrick，＆Kuhnert，2007; 郭，王，程， Wen，Wang＆Liang，2008; Harborne＆Baxter，1999; 江夏， Xu，＆Zheng，2004; Kim＆Lee，2005; Lai等，2007; Li＆Jiang， 2006; Miyazawa＆Hisama，2003; Wang，Yang，＆Guo，2008）。 其中，分离出acacetin 7-O-半乳糖苷和芹菜素7-O-beta;-D-（4“ - 咖啡酰）葡糖苷酸作为该草药的抗HIV化合物Hu，Chen，Shi，Kilkuskie，Cheng，＆Lee，1994; 李，金， ＆Lee，2003）。 绿原酸，3,5-，1,5-和4,5-二咖啡酰奎宁酸，木犀草素7-O-葡萄糖苷和木犀草素-7-O-葡糖苷酸显示出多种生物学特性，例如自由基清除和抗氧化剂，抗炎症，抗病毒，抗HIV，抗致突变，抗致癌，抗肝毒性，被认为对人类健康有益的衰老活动（Kurata，Adachi，Yamakawa，＆Yoshimoto，2007; Manach，Scalbert， Morand，Remesy和Jimenez，2004年; Yoshimoto，Yahara，Okuno，Is- 林，石黑和山川，2002年; Ooi，Wang，He，＆Ooi，2006; 标准杆 ejo，Caprai，Bastida，Viladomat，Jauregui＆Codina，2004).

采用二极管阵列和质谱检测（LC-DAD-MS）的高效液相色谱（HPLC）已经用于鉴定菊花的一些酚类组分Clifford，Wu，Kirkpatrick，＆Kuhnert，2007; Lai等人，2007），但迄今为止，还没有对酚醛树脂进行系统表征。 这样一个步骤不仅对于草药识别和质量控制是有价值的，而且还将增强对菊花生物活性及其对人类健康的保护的理解。

作为一个系统地确定食品植物，香料和草药中酚类化合物的项目的一部分，我们使用标准化的生长方法检测了菊花Lin＆ Harnly，2007）基于LC-DAD-ESI / MS。 使用这种方法，63种酚类化合物被首次分离并鉴定出来，25种。

2.材料和方法

2.1.标准和化学品

芹菜素，脱水槲皮素，绿原酸和木犀草素得自Sigma Chemical Co.（Saint Louis，MO，USA）。木犀草素7-O-葡糖苷，diosmetin 7-O-芸香糖苷（diosmin），quer- cetin 3-O-葡萄糖苷，圣草酚，圣草酚7-O-葡萄糖苷，芹菜素7-O-芸香糖苷（rhoifolin），芹菜素7-O-葡萄糖苷，acacetin7-0-芸香糖苷（linarin）和紫檀素购自Extra-合成物（Genay Cedex，法国）。 1,5-，1,3-二咖啡酰奎宁酸购自ChromaDex，Inc。（Santa Ana，CA，USA）。 在该实验室中制备或分离出3,5-，3,4-和4,5-二咖啡酰奎宁酸，并通过质子核磁共振（H NMR）分析（Lin＆Harnly， 2008).

HPLC级乙腈和甲醇，甲酸和盐酸（37％）购自VWR Scientic（Seattle，WA，USA）。 使用Milli-Q系统（Millipore Lab。，Bedford，MA，USA）从蒸馏水制备HPLC级别的水。

2.2. 植物材料和提取物

来自中国洪州的干菊花（C. morifolium）购自亚洲天然产品公司（加利福尼亚州旧金山）。 另外，在马里兰州的两个不同的东方食品商店购买了两包干菊花。 在提取之前，将植物材料粉碎并通过20目筛。 使用FS30超声波超声仪（Fisher Scientic，Pittsburg，PA，USA）在40kHz和100W下用甲醇 - 水（5.00mL，60:40，v / v）提取干燥的研磨材料（100mg）60分钟。 在室温下。 提取物

通过0.45mu;m尼龙acrodisk 13过滤器（Gelman，Ann Arbor，MI，USA）过滤，并将50mu;L提取物注射到分析柱上用于分析Lin＆Harnly，2007).

2.2.1.加热提取物

将过滤的提取物和标准溶液（1.0mL）在具有加热块的加盖玻璃管中在85℃下加热16小时以从缀合物除去甲氧基草酰基。 在室温下冷却10分钟后，在注射LC之前如上所述过滤溶液（Lin＆Harnly，2007).

2.2.2.酸水解样品

将过滤的提取物（0.50mL）与浓HCl（37％，0.10mL）混合并在覆盖的管中在85℃下加热2小时。 然后，

向混合物中加入0.40mL甲醇，并将溶液超声处理10分钟。 HPLC注射前将溶液重新过滤（Lin＆Harnly，2007).

2.3.LC-DAD-ESI / MSD条件

该仪器由安捷伦1100HPLC与二极管阵列检测器和质谱仪（MSD，SL模式）（Agilent Technologies，Palo Alto，CA，USA）相连接组成。 250毫米4.6毫米，5微米，

x

Symmetry C18色谱柱（Waters Corp.，Milford，MA，USA）用

20毫米3.9毫米内径，5流明，守卫保护柱流速1.0毫升/分钟。 柱温箱温度设定在25℃。 流动相由A（0.1％甲酸）组成

x

在水中）和B（0.1％甲酸的乙腈溶液）。 梯度在40分钟内从10％至26％B（v / v）线性变化，70分钟时为65％B，71分钟时为100％B，并保持在100％B至75分钟。 DAD设置在350,310,270和520 nm，用于实时监测峰强度，全谱（190-650 nm）是连续的，为工厂组件识别进行记录。 在m / z 100-2000范围内，在低和高碎裂电压（70V和250V）下，使用正离子和负离子（PI和NI）模式的电喷雾离子化同时获得质谱。

在这项研究中，MS数据收集在总离子计数 -（TIC）和选择性离子监测（SIM）模式。 NI在低激发能量（70V）和高碎裂电压（250V）下（片段）使用SIM模式以更有效地检测次要羟基肉桂酰奎宁酸。 在m / z 353（单咖啡酰奎宁酸），m / z 337（对香豆酰基奎宁酸），m / z 367（阿魏酰奎尼酸），m / z 515（二咖啡酰奎宁酸和咖啡酰奎宁酸葡糖苷） ，m / z 677（三咖啡酰奎宁酸和二咖啡酰奎宁酸葡糖苷），m / z 529（咖啡酰基咖啡酰奎宁酸），559（咖啡酰基咖啡酰奎宁酸），601（甲氧基乙酰基或马来酰二咖啡酰奎宁酸），397（乙酰基咖啡酰奎宁酸）和557（乙酰基 - 咖啡酰奎宁酸）。 在SIM模式下的检测允许共洗脱化合物的去卷积（基于不同的分子离子）并产生比在TIC模式下可实现的检测限低10倍的检测限（Lin＆Harnly，2007，2008a).

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3. 结果与讨论

3.1. 菊花类黄酮的鉴定

菊花中某些酚类化合物的结构见图1图。1。 菊花提取物和水解提取物的色谱图在350nm处以及在SIM模式下以m / z 677m / z检测到图2。 ，最大吸收波长（k最大），分子离子（[M H]/ [MH]）和主要碎片离子（PI / NI其中列出了主要峰的糖苷配基和其他离子）表格1。 三种菊花样品的色谱图（参见章节2）是相似的。

正确鉴定化合物表格1是基于使用本实验中开发的“标准化”扩增方法获得的参考植物样品（上标“a”）中的真实标准品或者确定的化合物的保留时间和UV / Vis和质谱的比较而制成的。 本研究中使用的方法被描述为“标准化”，因为相同的方法最初适用于所有的植物和标准物质。 大约200个标准品的色谱图

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