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摘 要

：转基因生物技术的发展日渐成熟，转基因产品给社会带来了巨大的经济效益，但是外源基因对环境的污染以及外源基因表达产物的过敏性及毒性也可能给人类健康带来极大的损害。为确保转基因产品及其衍生品的效益，安全性检测技术应运而生。当前国际上关于转基因产品的检测主要包括基于核酸水平和蛋白水平的检测，本研究以市场上购买的成品食用油为实验材料，通过对其进行定性和定量PCR分析，来检测生产该食用油的原材料是否含有外源基因。

关键词：食用油，外源基因，定性PCR，定量PCR

Abstract: With the development of genetically modified biotechnology, genetically modified products and their derivatives have brought great social and economic benefits to our society. However, the pollution of foreign genes to the environment and the sensitivity and toxicity of foreign gene expression products may also bring great harm to human health. To make sure the benefits of genetically modified products, safety testing technology are be developed. At present, The method of detection of genetically modified products includes nucleic acid and protein level. In this study, the edible oils purchased from the market were used as experimental materials. Through qualitative and quantitative PCR analysis, the raw materials for the production of this edible oil were detected whether there were exogenous genes.

Keywords: edible oil, foreign gene, Qualitative PCR, Quantitative PCR

目录

1前言 4

2 材料与方法 5

2.1 实验材料 5

2.1.1材料 5

2.1.2 试剂与耗材 5

2.1.3 仪器设备 6

2.2 实验方法 6

2.2.1抽提样品总DNA 6

2.2.2样品DNA浓度测定 6

2.2.3定性及定量引物与探针 6

2.2.4 PCR检测 6

3结果分析 8

3.1 DNA浓度测定 8

3.2定性检测 8

3.3荧光定量 PCR 检测 9

结论 10

参考文献 11

致谢 13

1前言

随着转基因产品市场的不断发展，转基因产品的安全引起世界范围内的广泛关注^[1]。通过现代生物技术，将目标基因片段导入特定的生物体内，从而使受体生物获得某种特定性状^[2,3]，这种生物称为转基因生物（Genetically Modified Organism, 简称GMO），是这种直接作为食品或以其为原料加工的食品称为转基因食品^[4]。转基因食品以其良好的抗逆性或高产功能等优点，能够提高人类农产品的品质，并为人类解决未来食物短缺问题提供了有效手段^[5]。

在外源基因整合到受体植物的过程中，其插入位点并不完全精准。存在有多拷贝的外源基因随机插入原有受体植物的基因组中的现象，而这种随机插入的外源基因会导致受体生物的原有基因的重排或缺失^[6,7]。另外，外源基因的蛋白表达后产生的食品是否致敏性或毒性，也引起广大科研工作者的高度重视。

目前，关于转基因生物外源基因对环境的影响收到广泛关注，而转基因生物的衍生产品的健康问题也是大家关注的焦点。近年来，关于转基因检测的报道较多，例如：许爽等使用定性PCR技术对含有卡纳霉素的8个番茄品种进行转基因检测^[8,9]，近年来，日益完善的转基因检测技术和安全性标准的不断规范为外源基因的检测和受体植物的研究提供了更多的可靠理论依据^[10]。

食用油在人类的生活饮食中是不可缺少的，是人类摄取脂肪酸类物质的重要途径，因此使用油的安全性与人类的健康息息相关。为确保人类的健康，在转基因产品日益商业化的今天，对成品食用油的外源基因安全性检测至关重要，同时，成品食用油的原材料（油菜、大豆、玉米等）如果流失或人为种植也会导致外源基因的漂流^[11-13]，对其产品进行转基因安全检测时人类社会与自然可持续和谐发展的重要保证。

Bar基因是目前使用最多的抗除草剂基因，大部分都用于大豆、玉米、油菜等作物外源基因的筛选标记。PCR是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称^[14]，利用DNA聚合酶在体外完成DNA的复制，利用该方法可以有效的检测目标生物体的外援标记基因^[15,16]，本研究使用成品食用油为研究对象，由于其油脂含量较高，其DNA提取具有一定的难度，本实验采用优化后的CTAB法抽提供试成品油基因组总DNA，获得的DNA使用Nano Drop测定其浓度和纯度，在DNA品质达标的情况下用作模板进行外源抗基因Bar的检测，并通过实时荧光定量对实验结果进行进一步的验证。

2 材料和方法

2.1 实验材料

2.1.1材料

本研究选取的是已经商业化的没有明确标识的成品食用油（共7种），购自淮安市淮阴区苏果超市，实验室标号为1-7。

2.1.2 试剂与耗材

实验所用dNTPs(2.5 mM)、Taq酶(5 U/μl)及DNA Marker购自北京佳兰生物公司、康为世纪公司提供电泳用DNA ladder maker。定性和定量引物及探针委托上海捷瑞生物工程有限公司合成。

2.1.3 仪器设备

MJ-Mini TM PCR仪、DYY-6D 电泳仪、FR-900 凝胶成像仪、EQ2033微型旋涡混合器、DELTA320 pH计、核酸微量分析仪（Nano Drop）、单道可调移液器。

2.2 实验方法

2.2.1 抽提总DNA

本研究采用改进的CTAB法^[17]。

2.2.2 DNA浓度测定

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