论文总字数：5914字

摘 要

：转基因生物技术的发展日渐成熟，转基因产品给社会带来了巨大的经济效益，但是外源基因对环境的污染以及外源基因表达产物的过敏性及毒性也可能给人类健康带来极大的损害。为确保转基因产品及其衍生品的效益，安全性检测技术应运而生。当前国际上关于转基因产品的安全性检测主要包括基于核酸水平和蛋白水平的检测，本研究以市场上购买的豆腐类制品为实验材料，通过对其进行定性和定量PCR分析，来检测生产该豆腐类制品的原材料是否含有外源基因。

关键词：豆腐类制品，外源基因，定性PCR，定量PCR

Abstract: With the development of genetically modified biotechnology, genetically modified products and their derivatives have brought great social and economic benefits to our society. However, the pollution of foreign genes to the environment and the sensitivity and toxicity of foreign gene expression products may also bring great harm to human health. Safety testing technology are be developed to make sure the benefits of genetically modified products. Nucleic acid and protein level are the mainly method for detection of genetically modified products.The soybean productions as experimental materials bought from market. Using qualitative and quantitative PCR analysis, the raw materials for the production of this edible oil were detected whether there were exogenous genes.

Keywords: Tofu product, foreign gene, Qualitative PCR, Quantitative PCR

目录

1前言 4

2 材料与方法 5

2.1 实验材料 5

2.1.1材料 5

2.1.2 试剂与耗材 5

2.1.3 仪器设备 6

2.2 实验方法 6

2.2.1抽提样品总DNA 6

2.2.2样品DNA浓度测定 6

2.2.3定性及定量引物与探针 6

2.4.3 PCR检测 6

3结果分析 8

3.1 DNA浓度测定 8

3.2定性检测 8

3.3荧光定量 PCR 检测 9

结论 10

参考文献 11

致谢 13

1前言

随着转基因产品市场的不断发展，转基因产品的安全引起世界范围内的广泛关注^[1]。通过现代生物技术，将目标基因片段导入特定的生物体内，从而使受体生物获得某种特定性状^[2]。转基因食品以其良好的抗逆性或高产功能等优点，能够提高人类农产品的品质，并为人类解决未来食物短缺问题提供了有效手段^[3]。

在受体植物接受外源基因的过程中，其插入位点并不完全精准。存在有多拷贝的外源基因随机插入原有受体植物的基因组中的现象，而这种随机插入的外源基因会导致受体生物的原有基因的重排或缺失^[4]。另外，外源基因在整合到受体植物中后的蛋白表达是否会成为过敏源或有毒，也是广大科研工作者的高度重视的问题。

目前，关于转基因生物外源基因对环境的影响收到广泛关注，而转基因生物的衍生产品的健康问题也是大家关注的焦点。近年来，关于转基因检测的报道较多，例如：许爽等使用定性PCR技术对含有卡纳霉素的8个番茄品种进行转基因检测^[5,6]，近年来，日益完善的转基因检测技术和安全性标准的不断规范为外源基因的检测和受体植物的研究提供了更多的可靠理论依据^[7]。

豆腐类制品在人类的生活饮食中是不可缺少的，也是人类摄取植物蛋白的重要途径，因此豆腐类的安全性与人类的健康息息相关。为确保人类的健康，在转基因产品日益商业化的今天，对豆腐类制品的外源基因安全性检测至关重要，同时，豆腐类制品的原材料（黄豆、绿豆、白豆、豌豆等）如果流失或人为种植也会导致外源基因的漂流^[8,9]，对其产品进行转基因安全检测时人类社会与自然可持续和谐发展的重要保证。

目前使用最多的抗性标记基因是Bar，主要用于大豆、玉米等作物外源基因的筛选标记。PCR是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称^[10]，利用该方法可以有效的检测目标生物体的外源标记基因^[11,12]，本研究使用豆腐类制品为研究对象，采用优化后的CTAB法抽提供试豆制品基因组总DNA，获得的DNA使用Nano Drop测定其浓度和纯度，在DNA品质达标的情况下用作模板进行外源抗基因Bar的检测，并通过实时荧光定量对实验结果进行进一步的验证。

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1材料

选取已经商业化的没有明确标识的豆腐类制品（共5种），购自淮安市淮阴区菜市场，实验室标号为1-5。

2.1.2 试剂与耗材

实验所用dNTPs(2.5 mM)、Taq酶(5 U/μL)及DNA Marker购自北京佳兰生物公司、康为世纪公司提供电泳用DNA ladder maker。定性和定量引物及探针委托上海捷瑞生物工程有限公司合。

2.1.3 仪器设备

PCR仪、DYY-6D 电泳仪、FR-900 凝胶成像仪、EQ2033微型旋涡混合器、DELTA320 pH计、核酸微量分析仪（Nano Drop）、单道可调移液器。

2.2 实验方法

2.2.1 抽提豆制品总DNA

本研究抽提豆腐制品基因组总DNA采用改进的CTAB法^[13]。

2.2.2 DNA浓度测定

使用Nano Drop将获得的基因组总DNA进行分析，测定通过该方法获得的DNA是否能够用于定性和定量PCR分析。

2.2.3定性及定量引物与探针

由于目前我们的转基因经济类作物研究较为迅速，针对转基因经济类作物的检测体系也较为成熟，因此在检测供试豆制品时，可以直接根据农业部发布的检测标准进行具体引物和探针序列详见表1和表2。

2.4.3 PCR检测

目前关于转基因产品的检测主要是基因核酸和蛋白的检测，但是在豆腐生产过程中，大量的基因被破坏，因此使用外源基因蛋白检测的假阴性概论较高，为了更加精准的检测目标豆腐类制品，本实验采用定性和定量PCR进行外源Bar检测。

（1）定性检测

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