论文总字数：22724字

摘 要

开心果是我们日常生活中常见的一种商业食品，它有着良好的营养价值和感官特性，在世界各地广受欢迎。然而，它也是一种食物过敏原，因此我们有必要开发出一种适当的方法去检测食品中是否存在开心果过敏原。在本研究中，我们以测序得到的Pis V 1的编码DNA序列为模板，设计和筛选得到特异性引物，然后进行环介导等温扩增（LAMP）分析。通过在反应物中加入SYBR GreenΙ染料，然后观察颜色变化来判断反应是否发生，操作简单，检测方便。我们所建立的这种LAMP分析体系对开心果具有很高的特异性，与夏威夷果、榛子、腰果、芒果、核桃、大豆、杏仁、花生无交叉反应。另外，该LAMP分析法也有着较高的灵敏度，可检测至少10 pg纯化的开心果基因组DNA。同时，我们也探究了不同时间长度煮沸处理和高温高压处理对实验的影响，结果发现，高温高压处理影响了开心果检测产物的可扩增性，而进行煮沸处理后的样品纯化基因组DNA对LAMP反应并没有影响。为了分析本次开发的LAMP试验对商业食品的适用性，我们也采用了LAMP法对10种不同类型的商业食品进行分析，结果表明LAMP法同样适用于商业食品的检测。该LAMP法快速高效，不需要复杂的检测仪器，能够特异、灵敏、稳定地检测出食品中开心果过敏原。

关键词： 环介导等温扩增，过敏原，开心果，可视化，荧光染料

Abstract: Pistachio is a common commercial food in our daily life. It has good nutritional and sensory properties and is therefore popular all over the world.  However, it is also a food allergen, so it is necessary to develop an appropriate method to detect the presence of pistachio allergens in food.  In the present study, we designed and screened specific primers using the sequenced DNA sequence of Pis V 1 obtained by sequencing, and then performed loop-mediated isothermal amplification (LAMP) analysis.  The fluorescent dye SYBR GreenI can be added to the reaction product to observe the color change to judge whether the reaction occurs, the operation is simple, and the detection is convenient.  The LAMP assay system we have established is highly specific for pistachios and does not cross-react with cashews, mangoes, walnuts, almonds, macadamia nuts, hazelnuts, peanuts, and soybeans.  In addition, the LAMP assay has a high sensitivity to detect at least 10 pg of purified pistachio genomic DNA.  At the same time, we also explored the effects of different lengths of boiling treatment and high temperature and high pressure treatment on the experiment. It was found that the high temperature and high pressure treatment affected the amplifiability of the pistachio detection product, and the sample after boiling treatment purified the genomic DNA to LAMP.  The reaction did not affect.  In order to analyze the applicability of the LAMP test developed for commercial foods, we also used the LAMP method to analyze 10 different types of commercial foods. The results show that the LAMP method is also suitable for the detection of commercial foods.  The LAMP method is fast and efficient, does not require complicated detection instruments, and can detect pistachio allergens in foods in a specific, sensitive and stable manner.

Keywords: Loop-mediated isothermal amplification method,allergen,pistachio,visualization,fluorescent dyes

目 录

1 前言 ………………………………………………………………………4

1.1食物过敏及过敏原介绍 …………………………………………………4

1.2 LAMP方法的原理 ………………………………………………………5

1.3反应物的检测方式 ………………………………………………………6

1.4 研究内容及研究意义 ……………………………………………………7

2 实验材料与方法 ………………………………………………………… 7

2.1实验材料与仪器 ………………………………………………………… 7

2.2实验方法 ………………………………………………………………… 9

2.3特异性实验 …………………………………………………………… 13

2.4 灵敏度实验 …………………………………………………………… 13

2.5 煮沸处理对检测的影响 ………………………………………………14

2.6 高温高压处理对检测的影响 ………………………………………… 14

2.7 商业化食品的检测 …………………………………………………… 14

3 实验结果与分析 …………………………………………………………14

3.1 pis v 1扩增产物琼脂糖凝胶分析及测序得到DNA序列结果………14

3.2 LAMP检测引物的设计及在序列中的分布 ……………………………15

3.3 特异性分析结果………………………………………………………16

3.4 灵敏度分析结果………………………………………………………16

3.5 煮沸处理对检测的影响结果……………………………………………17

3.6 高温高压处理对检测的影响结果………………………………………17

3.7 商业化食品的检测结果 ………………………………………………18

4 讨论 …………………………………………………………………… 18

5 结论 …………………………………………………………………… 21

参考文献 ………………………………………………………………… 22

致谢 ………………………………………………………………………… 25

1. 前言

1.1 食物过敏及过敏原介绍

剩余内容已隐藏，请支付后下载全文，论文总字数：22724字