摘 要

黄曲霉毒素是剧毒和致癌物质，非常容易污染各类食物以及农产品，所以建立快速而有效的分析方法对于其监控和检测具有十分重要的意义。电化学生物传感器由于操作过程步骤少又简单、成本价格低、灵敏度高、特异性强、不需要对样品进行复杂的前处理等特殊优势，被广泛地应用于黄曲霉毒素检测。文章综述了化学分析方法、仪器分析方法、免疫分析法在黄曲霉毒素检测中的应用现状，并对电化学生物传感器的应用前景进行展望，希望为进一步发展简便、快速、灵敏的新型电化学传感器提供新的参考。本实验首先将黄曲霉毒素AFB₁的单克隆抗体修饰到丝网印刷双极电极的镀金阴极端，利用竞争法将辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗原与样品中的AFB₁混合加入到阴极端，阴极端固定HRP的量与样品中AFB₁的量成反比，HRP在双氧水的作用下会催化苯胺聚合形成聚苯胺，导致双极电极阳极端电致化学发光电位和发光强度的改变，达到裸眼检测黄曲霉毒素AFB₁的目的。

关键词：电致化学发光 双极电极 电化学免疫传感器 黄曲霉毒素

Screen printing electrodes for rapid detection of aflatoxin B1

Abstract

Aflatoxins are severely toxic and carcinogenic substances, and are very easy to pollute all kinds of food and agricultural products. As the consequence, the establishment of rapid and effective analytical methods is of great importance for their monitoring and detection. Electrochemical biosensors have been widely used in the detection of aflatoxins because of their simple operation, low cost, high sensitivity, high specificity, and no need for complex processing of samples. This paper reviews the application and research progress of chemical analysis methods, instrumental analysis methods and immunoassays in aflatoxins. The paper also prospects the application of electrochemical biosensors in aflatoxins, and hopes to provide a new reference for the further development of simple, rapid and sensitive new electrochemical sensors. In this experiment, the monoclonal antibody of aflatoxin AFB1 was first modified to the gold-plated cathode end of the screen-printed bipolar electrode, and the horseradish peroxidase-labeled antigen was mixed with the AFB₁ in the sample to the cathode end by a competition method. The amount of HRP fixed at the cathode end is inversely proportional to the amount of AFB₁ in the sample.HRP can catalyze the polymerization of aniline to form polyaniline under the action of hydrogen peroxide, which leads to the change of electrochemiluminescence potential and luminescence intensity at the anode end of the bipolar electrode. Finally, the purpose of detecting toxins by naked eyes will be achieved.

Key words: Electro-chemical luminescence; Bipolar electrode; Electrochemical Immune Sensors; Aflatoxin

目 录

摘 要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1引言 1

1.2黄曲霉毒素B₁ 1

1.2.1黄曲霉毒素简介 1

1.2.2黄曲霉毒素危害 1

1.3黄曲霉毒素B1的常用检测方法 2

1.3.1薄层层析法 2

1.3.2高效液相色谱法 2

1.3.3酶联免疫吸附法和胶体金快速检测卡 3

1.4 BPE-ECL检测技术 4

1.4.1 ECL的介绍 4

1.4.2双极电极（BPE）的介绍 4

1.4.3 BPE-ECL传感器 5

1.5电化学免疫传感器 5

第二章 实验内容 7

2.1实验原理 7

2.2实验试剂与仪器 7

2.2.1实验仪器 8

2.2.2实验试剂 8

2.3实验内容 9

2.3.1具体实验步骤 10

2.3.2 ECL信号检测 10

第三章 结果与分析 11

3.1实验结论与分析 11

3.2展望 13

参考文献 15

致谢 17

第一章 文献综述

1.1引言

近年来，随着人们生活水平的提高，人们对食品安全和卫生的关注度越来越高，这要求我们在生产中快速且准确地检测出食品中是否存在相关真菌毒素。黄曲霉毒素是最早被人们发现和被研究最多的霉菌毒素，是对动物和人类最有害的真菌毒素。因此，建立准确、快速、灵敏的检测方法，采取有效的防治控制措施，对降低其进入人体的安全隐患，保障国民健康具有重要意义^[1]。电化学生物传感器具有操作简单、成本低、灵敏度高、特异性强、无需复杂的样品处理等特别的优点，在黄曲霉毒素的检测中得到了广泛的应用。本课题在传统检测方法优缺点的基础上试构建基于BPE-ECL技术的真菌毒素电化学生物传感器，利用抗体和真菌毒素之间的特异性识别，构建农产品中黄曲霉毒素的检测方法，弥补国标方法检测真菌毒素耗时、成本高、工作量大等不足，降低劳动强度，提高检测效率，适应现代批量筛查的需求。

1.2黄曲霉毒素B₁