1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

文 献 综 述 1.定向进化技术的发展与应用 定向进化技术是一种利用实验室手段通过反复改造遗传多样性，结合文库高通量筛选而获得理想性状生物体的过程，如今已成为在基础生物学和应用生物学领域应用最广泛和最有效的技术之一。

它不需要了解酶结构和功能等方面的信息，通过对基因的多轮突变和重组来创造突变文库，再利用高通量的筛选手段从成千上万的突变后代中鉴定出性能改善的突变体[1]。

定向进化策略对自然界蛋白质引入新功能仍然是目前研究的难点，主要表现在两个方面：（1）蛋白质新功能的产生通常是一系列突变、重组共同作用引起的，而目前大部分定向进化策略，比如易错pcr，dna shuffling等，都只局限于少数氨基酸发生突变[2]；利用定向进化策略引入蛋白质新功能通常需要对原始序列进行大幅度的改造，所构建的突变体库中含有大量无活性蛋白，增大了筛选的难度[3]。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

拟解决的问题： 本课题主要对已报道的两种简并引物设计方法和常规nnn或者nnk简并引物在相同条件下进行比较。

通过对采用不同方法构建的突变文库多样性的初步评价，确定各个方法的优劣。

技术手段： 1. 使用引物设计软件设计相应的简并引物用于饱和突变文库的构建； 2. 使用分子生物学技术，pcr 构建饱和突变文库 3. 使用电穿孔仪完成电转化 4. 采用测序技术分析构建的饱和突变文库的质量 研究内容： 首先根据设计相应的简并引物；其次用不同的简并引物在相同条件下构建饱和突变文库；第三，通过测序对文库多样性进行分析，确定由两种不同简并引物构建的饱和突变文库多样性的差别。