达托霉素注射剂的稳定性研究开题报告
2020-06-10 22:43:20
1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）
文 献 综 述
一、前言
达托霉素（Daptomycin简写为Dapt）适应症为严重感染的患者，个性化治疗的精准人群为革兰氏阳性（G ）敏感菌株引发的感染，引起的并发性皮肤及皮肤结构感染[1]。不良反应有：注射部位反应和发烧；神经系统症状有头痛、失眠和眩晕，其它还有皮疹、瘙痒、肝功异常、CPK升高、真菌感染、泌尿道感染、低血压等[2]。总的来讲，Dapt不良反应较其疗效是可以接受的，不会导致患者致命性副作用产生。达托霉素在体外具有广谱抗革兰氏阳性菌的作用。这些细菌包括耐药菌，如耐万古霉素的肠球菌，耐甲氧西林的金葡菌，糖肽类敏感的金葡菌，凝固酶阴性的葡萄球菌和耐青霉素的肺炎链球菌。目前，临床上对于这些耐药菌可选择的抗生素很少，而达托霉素在临床上有着明显的优势，其临床耐药菌株的出现率非常低，其对抗耐药菌的优势在未来一段时间内会愈加显著，应用前景也非常广阔。因此，开发该产品有着极其重要的临床意义。2003年底注射用达托霉素在美国FDA首次以商品名Cubicin上市，规格为350mg和500mg。我国CFDA于2009年已批准同意该品种进口，商品名为克必信，规格为500mg，临床主要用于治疗感染性内膜炎、复杂性皮肤及皮肤软组织感染（CSSSI）。但达托霉素对温度、pH值特别敏感，其制剂仿制难度较高，本课题主要对注射用达托霉素的稳定性进行研究。
二、达托霉素的理化性质
达托霉素以十三个氨基酸（Amino acid）作为基本构成要素，其中的十个Amino acid形成闭合环肽，剩余的三个Amino acid链接至环肽上，呈线状排列。
通用名：达托霉素
英文名：Daptomycin
汉语拼音：DaTuoMeiSu
分子式：C72H101N17O26
英文化学名：N-decanoyl-L-tryptophyl-L-asparaginyl-L-aspartyl-L-threonylglycyl-
L-omithyl-L-aspartyl-D-alanyl-L-aspartylglycyl-D-seryl-threo-3-methyl-L-glutamyl-3-anthraniloyl-L-alanine ε1-lactone
化学结构式：
分子量：1620.67
三、达托霉素作用机制和药理毒理。
Dapt作用机制很独特[3]，由于其具有较佳的亲脂性，可以与细胞膜融合，目的是为了细菌的生物合成、增殖，从而破坏细菌的细胞膜，细菌在Dapt的持续作用下，其内容物大量流出，细菌的结构不断得到破损，就能够起到杀菌的目的。鉴于其独特的作用机理，通过使细菌内容物大量流出从而达到杀菌的目的，故产生耐药的可能性比较小。Dapt低的副作用，患者的较好耐受性，在其适用人群中得到了普遍共识，优越的治疗效果也收到了临床医生青睐。Dapt达到治疗效果需要一定的浓度，故给药方案对疗效起到至关重要的作用，FDA与EMA推荐的治疗途径为静脉滴注（iv），剂量为按每公斤体重给予4.0mg，1次/d，其抗生素后效应持久，达1.5～6h。Dapt由于较好的疗效，其适应症也得到进一步扩大，如2006年，美国药监局扩大其适用人群，具体人群为右侧心内膜炎，进一步定义为MSSA或MRSA导致的，具体操作如剂量、用法等同首次批准的适应症。
Dapt非临床试验表明，Dapt在使用剂量（每天）按每公斤体重0.2～400 mg，
具体Dapt给药间隙为第一天、第二天、第四天和第八天给药，血药浓度下面积AUC（0→∞）与Dapt给予的剂量相除的数值为9.4。Dapt按给药剂量每公斤体重为10 mg，Dapt的半衰期t1/2 β为0.9-1.4小时，Dapt与剂量不呈线性相关性。血浆蛋白结合率平均为90％。血药浓度下面积、血药浓度下面积（0→24）/MIC，我们一般采用此算法评价体内抗菌活性，该指标也是很好的评价指标，Dapt这两个指标分别为83%-86%和86%。对肺炎球菌，起到杀菌作用的Cmax/MIC和AUC（0→24）/MIC分别为12～36和75～237；对金葡菌此两指标分别为59～94和388～537；对肠球菌，此两指标分别为0.14～0.25和0.94～1.67。
急性毒性实验：根据美国lilly制药实验室提供的数据显示，Dapt小鼠的LD50为每公斤体重142～159 mg (而比格犬每公斤体重为200 mg)，猴每公斤体重LD50=25mg~200mg，非临床结果显示动物未见死亡。
长期毒性实验：在对大鼠和犬进行的重复给药研究中，最高给药剂量分别达150 mg/kg/day和100 mg/kg/day时未见明显的纤维变性和横纹肌溶解。当给药时间从1个月延长至6个月时，骨骼肌肉病变的程度未见加重。严重程度呈剂量依赖性。所有的肌肉效应包括显微镜下的变化在停止给药后30天内完全逆转。
致癌性、遗传毒性、依赖性、生殖毒性等：尚未进行动物长期致癌性研究以评估Dapt的潜在致癌性。Dapt在大量的非临床试验中，Dapt在大鼠和家兔中未见到对生育或出生的幼崽产生影响。
通过全身主动过敏试验、被动皮肤过敏试验、兔血管刺激试验、体外溶血试验，注射用达托霉素对豚鼠未见被动皮肤过敏及全身主动过敏反应；对兔耳缘静脉进行病理组织学检查，注射用达托霉素未见明显的血管刺激反应。3.6mg/ml注射用达托霉素不引起体外红细胞的溶血，应用安全可靠。
四、注射用达托霉素质量标准研究
对本品性状、鉴别、水分检查、酸度检查、有关物质检查、含量测定等项指标进行研究。建立简便快速、灵敏度高的检测方法，并根据《中国药典》（2005年版）要求，对标准中重要检测方法，开展方法学验证，以适合注射用达托霉素质量研究工作，从而建立有效、可控的质量标准。
注射用达托霉素质量标准
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检验项目 |
方法 |
放行标准限度 |
货架期标准限度 |
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性状 |
目视检查法 |
浅黄色至淡褐色冻干块状物 |
浅黄色至淡褐色冻干块状物 |
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鉴别 |
红外分光光度法 |
注射用Dapt的IR应与对照品的IR一致； |
本品的IR与对照品的IR应一致； |
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高效液相色谱法 |
在Assay项下记录的HPLC中，Rt两者（自制制剂与参比制剂）应一致。 |
在Assay项下记录的HPLC中，Rt两者（自制制剂与参比制剂）应一致。 | |
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酸度 |
酸度测定法 |
4.0～5.0 |
4.0～5.0 |
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溶液澄清度 |
澄清度检查法 |
注射用Dapt所配制溶液应澄清 |
注射用Dapt所配制溶液应澄清 |
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有关物质 |
高效液相色谱法 |
内酯水解物≤0.9% 脱水达托霉素≤2.0% β异构体≤1.5% 杂质1≤0.5% 杂质2≤1.5% 杂质3≤1.0% 杂质4≤0.5% 其他最大单杂≤0.15% 总杂≤4.5% |
内酯水解物≤1.5% 脱水达托霉素≤3.5 % β异构体≤2.0% 杂质1≤0.5% 杂质2≤1.5% 杂质3≤1.0% 杂质4≤0.5% 其他最大单杂≤0.15% 总杂≤8.0% |
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水分 |
水分测定法 |
≤2.0% |
≤2.0% |
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装量差异 |
装量差异检查法 |
注射用Dapt应符合规定 |
注射用Dapt应符合规定 |
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可见异物 |
可见异物检查法 |
注射用Dapt应符合规定 |
注射用Dapt应符合规定 |
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不溶性微粒 |
不溶性微粒检查法 |
按照ChP2015，注射用Dapt应符合规定 |
按照ChP2015，注射用Dapt应符合规定 |
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无菌 |
无菌检查法 |
注射用Dapt应符合规定 |
注射用Dapt应符合规定 |
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细菌内毒素 |
细菌内毒素检查法 |
注射用Dapt应＜0.30EU/mg |
注射用Dapt应＜0.30EU/mg |
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含量 |
高效液相色谱法 |
按无水物计算，含达托霉素（C72H101N17O26）应为87.0％～103.0％，按平均装量计算，含达托霉素（C72H101N17O26）应为标示量的95.0％～115.0％ |
按无水物计算，含达托霉素（C72H101N17O26应为 87.0％～103.0％，按平均装量计算，含达托霉素（C72H101N17O26）应为标示量的95.0％～115.0％ |
五、参考文献
[1] 林卓辉, 唐密密, 刘艺平.达托霉素临床评价及研究进展[J].中南药学, 2015(04): 402-405.
[2] 毛秀华.达托霉素致罕见不良反应及应用注意事项[J].海峡药学, 2014(09): 159-160
[3] 袁瑾懿, 王明贵.FDA药物安全通报:Cubicin(达托霉素)使用相关嗜酸性粒细胞性肺炎[J].中国感染与化疗杂志, 2011(03): 198.
[4]洪娟, 刘佳佳.达托霉素的作用机制和药物来源的研究进展[J].广州化工, 2012(09): 28-30.
[5] 马婕, 贾宇, 周旻,等.环脂肽类抗生素达托霉素研究进展[J].河北化工, 2012(05): 25-26.
[6] 史丽娟, 石磊.新型抗革兰阳性菌药物#8212;#8212;达托霉素[J].中国医药导刊, 2008(07): 1100-1102.
[7] 林卓辉, 唐密密, 刘艺平.达托霉素临床评价及研究进展[J].中南药学, 2015(04): 402-405.
[8] 毛秀华.达托霉素致罕见不良反应及应用注意事项[J].海峡药学, 2014(09): 159-160.
[9] Rege S, Mohr J, Lamp KC,et al.Safety of daptomycin in patients completing more than 14 days of therapy: results from the Cubicin(R) Outcomes Registry and experience[J].Int J Antimicrob Agents, 2013, 41(5): 421-425.
[10] Levine DP, Lamp KC.Daptomycin in the treatment of patients with infective endocarditis: experience from a registry[J].AM J MED, 2007, 120(10 Suppl 1): S28-S33.
[11] Marchand S, Lauda M, Le Moal G,et al.Pharmacokinetics of daptomycin in a patient with severe renal failure not receiving dialysis[J].Antimicrob Agents Chemother, 2013, 57(6): 2898-2899.
[12] 袁莉莉, 李光辉.达托霉素在耐药革兰阳性菌感染中的临床应用[J].中国感染与化疗杂志, 2015(03): 275-280.
[13] 刘浩, 许茜, 白楠,等.感染性心内膜炎治疗新药#8212;#8212;达托霉素[J].中国临床药理学杂志, 2010(06): 462-465.
2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
1、本课题讨论并且建立了达托霉素注射剂的含量测定。建立了高效液相色谱法快速、准确测定达托霉素注射剂中主药含量的测定。
2、对有关物质进行专属性实验、杂质干扰amp;定位试验。
3、将进行达托霉素影响因素实验、达托霉素加速实验、达托霉素长期实验和达托霉素配伍稳定性实验来对达托霉素注射剂稳定性进行研究。
