1. 毕业设计（论文）的内容和要求

论文内容 本实验根据米氏硫胺素芽孢杆菌(aneurinibacillus migulanus)中核苷磷酸化酶的基因序列，设计引物，扩增其基因，构建重组质粒并转化入大肠杆菌进行表达，经过载体、诱导时间、诱导温度、iptg浓度等参数优化，获得可溶性表达，并测得重组菌中关键酶基因的酶活。

论文要求 1．文献查阅 掌握文献查阅的一般方法，学会使用计算机在中国期刊网，维普数据库，超星数字图书馆，美国化学学会（acs）数据库，ca，sci等检索资源上查阅关于威兰胶发酵工艺尤其是补料分批发酵的相关文献。

2．文献阅读及综述 阅读与课题相关的外文及中文文献，了解国内外的研究动态，撰写文献综述。

2. 参考文献

[1] Zhu S, Song D, Gong C. Biosynthesis of nucleoside analogues via thermostable nucleoside phosphorylase[J]. Applied Microbiology and Biotechnology, 2013, 97(15):6769-78. [2] Min Z, Pugmire M J, Bao Q V, et al. Cloning, expression and crystallization of pyrimidine nucleoside phosphorylase from Bacillus stearothermophilus[J]. Acta Crystallographica Section D, 1999, 55(1):287. [3] Xiong S, Wang Y, Wang X, et al. Enzymatic synthesis of 2'-deoxyuridine by whole cell catalyst co-expressing uridine phosphorylase and thymidine phosphorylase through auto-induction system.[J]. Journal of Bioscience Bioengineering, 2014, 118(6):723-7. [4] 丁庆豹. 核苷磷酸化酶的克隆、表达与应用[D]. 华东理工大学, 2010. [5] 张广宇. 大肠杆菌胸苷激酶和聚磷酸激酶的重组表达与应用研究[D]. 华东理工大学, 2013.. [6] 樊华伟, 傅绍军, 邵志宇,等. 核苷类药物酶法合成研究进展[J]. 生物技术通讯, 2005, 16(6):690-692. [7] 孙晓峰. 核苷类药物的酶促改性和衍生化[D]. 浙江大学, 2005. [8] 闫蓬勃, 邱蔚然, 丁庆豹,等. 核苷磷酸化酶的产酶条件优化的研究[J]. 药物生物技术, 2001, 8(2):83-85. [9] 梅建凤, 罗丽琴, 王鸿,等. 化学-酶法合成胸苷的研究[J]. 浙江工业大学学报, 2014, 42(2):172-177. [10] 夏俊刚, 何逵夫, 谢希贤,等. 枯草芽孢杆菌嘌呤核苷磷酸化酶酶学性质研究及在利巴韦林酶法合成中的应用[J]. 中国生物工程杂志, 2010, 30(12):53-59. [11] 邹志. 酶法合成脱氧核苷酸及其类似物[D]. 华东理工大学, 2014. [12] 王镜岩, 朱圣庚, 徐长法等, 生物化学[M]， 第三版, 北京, 高等教育出版社, 2006. [13] 姜立春, 罗英, 韩文君,等. 嘧啶核苷磷酸化酶基因工程菌发酵条件的优化[J]. 生物技术通讯, 2007, 18(2):252-254. [14] Luo W, Liu Y, Zhu X, et al. Cloning and characterization of purine nucleoside phosphorylase in Escherichia coli and subsequent ribavirin biosynthesis using immobilized recombinant cells.[J]. Enzyme and Microbial Technology, 2011, 48(6-7):438-44. [15] 罗玮. 重组大肠杆菌高效生产嘌呤核苷磷酸化酶和L-色氨酸的研究[D]. 浙江大学, 2011.

3. 毕业设计（论文）进程安排

起讫日期 设计（论文）各阶段工作内容 备 注 2017.2.15-2017.3.2 初步实验，考察初步结果 2017.3.3-2017.3.9 查阅文献，设计实验方案 2017.3.10-2017.5.4 完善实验方案，系统地进行实验 2017.5.5-2017.5.31 整理实验数据，总结实验结果 2017.6.1-2017.6.15 撰写毕业论文