摘 要

By cultivating Dunaliella salina and changing the light conditions, the nitrogen content and salinity in the culture medium, the control group is set up respectively, the OD value is measured, and the content of cells and pigments are calculated. The figure shows that the cells of Dunaliella salina and pigment content increase under the condition of high light intensity, high nitrogen content and low salinity.

1绪论

盐藻（Dunaliella salina），也叫“杜氏盐藻”。属于绿藻纲，盐藻科的一种藻类。盐藻是一种非常耐盐的单细胞真核绿藻。盐藻的形体非常小, 盐藻细胞长度大约为13~19μm , 宽度大约为5~21μm。糖蛋白组成的包被存在于盐藻的体中。盐藻它没有细胞壁，因为盐藻外部形态不是非常的固定, 当外部环境条件一直变化的时候，体型的变化比较明显，形状有葫芦形、椭圆形等等，两条同长的鞭毛长在藻体两侧，藻体内蕴含丰富的一杯状色素体,这个色素体在一块非常大的蛋白核的附近,一个大并且明显的眼点存在于盐藻细胞上。盐藻的生殖方式为纵裂，还有纵子也是它的生殖方式，盐藻几乎只能在海水里生长并发育的水中生长发育的另类独特生命，因为盐藻含有稀有而。ß-胡萝卜素的含量量非常的丰富。胡萝卜素可以通过人工培养的方式来进行获取。甘油也可以通过这种方式获得。盐藻作为饲料能够喂养鱼等水类生物。盐藻是生长发育在含盐度非常非常高的湖中。盐藻是一种独特的浮游生物。盐藻是人类历史上发现的可以在含盐度很高大量的的生命元素，从而地球上的科学家们给了它一个细胞动力源的美名。盐藻基本生长发育在靠近海的水域范围里, 对于不同盐度的的水都能适应，盐藻的生存区间非常的大,能在盐度和淡水 (lt;0.2mol/L NaCl) 非常接近的环境下生长发育，也能在饱和盐水 (gt;7mol/L NaCl) 中生长发育，可以说是一种非常难得独特的藻。盐藻能在0~37℃的温度范围下生长发育。在绝大多数的情况下，盐藻以无性繁殖作为自己的繁衍后代的方式,。盐藻的营养部分从纵轴分裂分开成2个子细胞。盐藻只有在营养条件不佳时会进行有性生殖的繁殖方式, 因为盐藻拥有两条同样长度的鞭毛的配子接合成为合子, ,发育之前会产生 3~9 个游动的细胞。  盐藻能在含盐度非常高的水体中生长发育的很好, 因此盐藻可以在其他生物不能生长的阳光照射非常足的高盐水体的地区培养,并且能够杜绝水体中繁衍其他各种各样的藻类和以藻类为食的动物, 因为盐藻是没有细胞壁的生物, 所以作为饵料难以消化分解的困扰是不会发生的。把藻粉加到一般动物的饵料中, 能够使得动物的生长发育速度变快,使得饵料的转化率变多, 更重要的是可以杜绝疾病的产生。就是因为这样,如果我们能够合理研究利用盐藻, 大力开发盐藻这样的“绿色饲料”,对于动物养殖质量的提高，动物养殖成本的降低，对于动物养殖的排污减少都有格外重要的意义。盐藻因为它潜在蕴含经济价值和相比其他独一无二的优势，已经使得盐藻变成大规模研究培养的对象。世界上许多货架都在致力于盐藻的培养，开发和研究,其中有德国、瑞典、西班牙、瑞士等。我国广东省还有内陆的一些地方同样在研究培养盐藻。

盐藻素是通过高科技手段从盐藻细胞体内提取的，经过精炼提纯最后制得。盐藻细胞体内蕴含的类胡萝卜素是其他一半藻类所不具有的，这些类胡萝卜素有好多种，都具有非常强的抗氧化作用。除了这些色素以外，盐藻素还蕴含丰富的矿物质元素和微量元素，更有可以为人类自身所用的氨基酸，有好多。盐藻素提取比较困难，来源也比较苛刻。但是在如今现代生活中，它可以运用到各个方面，是现在研究的大热门，也是足以去改变未来世界的。

盐藻素对人体机体以及细胞的生理作用有以下几个方面。第一个作用是盐藻素可以清除自由基，自由基在人体内广泛存在，由于它缺少电子，所以在人体内游荡的过程中，会去抢夺细胞内的电子，这样会对人体造成伤害，长此以往，会产生疾病并且加快人体的衰老。所以盐藻素有抗衰老的作用。盐藻素另一个非常重要的作用是能够调节人体的酸碱平衡，占我们身体比重很大的体液如果酸碱失衡，会对细胞造成伤害，引发各种各样的疾病。而盐藻素就有能够调节酸碱平衡的作用，原因是盐藻素还有大量的矿物质。盐藻素还能补充营养。等等还有其他很多作用。

培养基（Medium）是作为微生物、植物和动物组织生长发育和保持生长发育用的人工配制的养料。根据实验目的的不同，培养基的配置原料也不尽相同。盐藻虽然对于环境盐度的适应范围非常大，无论是高盐还是低盐，开放还是封闭，都要尽量选择能使盐藻生长情况达到最好，色素积累量最高的培养基。

2材料与方法

2.1 实验材料

盐藻及培养基 UV-300分光光度计

培养基成分如下：

F/2培养基

微量元素 含量

NaEDTA 4.16g

Fecl3.6H2O 3.15g

CuSO4.5H2O 0.01g

ZnSO4.5H2O 0.022g

CoCl2.6H2O 0.01g

MnCl2.4H2O 0.18g

Na2MoO4.2H2O 0.006g

维生素

维生素B12 0.0005g

维生素B1 0.1g

维生素H 0.0005g

培养基

NaH2P04.2H2O 0.00565g

NaNO3 0.075g

2.2 实验方法

得到菌种后，在摇床中，以100r/min，25摄氏度的条件培养8天。将藻液取出，用6个50ml离心管以6000r/min的速度在离心机中离心5min，离心结束后，用移液枪把水吸出，在6个离心管中分别倒入5oml培养基，摇晃，使得盐藻完全溶解于培养基。完全溶解后，将6个离心管中的藻液分别倒入6个500ml的锥形之中，再分别用量筒量取50ml培养基，把藻液加至100ml。将6个锥形瓶分别标号1，2，3，4，5，6。用1ml移液管分别取2ml藻液，在紫外分光光度计中，测量在630nm处的吸光度的值，分别记录下6个值。于6个锥形瓶中再分别取1ml藻液于1ml离心管中，分别编号为1，2，3，4，5，6。在离心机中，以6000转每分钟，25摄氏度的条件离心5mim。离心完成后，用移液枪将离心管中的水吸出，吸的时候注意不要将色素吸出，否则会影响测量结果。在上清液取出后，分别加入2ml无水乙醇，在紫外分光光度计中，分别在450nm，645nm和663nm出测量每一组的吸光度的值。此用作之后的色素含量的计算。将6瓶锥形瓶分为2组，1，2，3为一组，4，5，6为一组，第一组在高光照强度下培养，第二组在低光照强度下培养。两组分别放入摇床中不同的位置，以100转每分钟。25摄氏度的条件培养。经测量，高光照强度的光照强度为500-700lux，低光照强度的光照强度为300-400lux。之后每隔一天测量一次，分别取2ml藻液在紫外分光光度计里测量630nm处的吸光度的值，之后再取1ml藻液经离心机以6000转每分钟的速度离心5分钟，去上清液，加2ml无水乙醇，在紫外分光光度中分别测量450nm，645nm和663nm处的吸光度的值。一共测量6次。结束第一阶段实验后，将6瓶锥形瓶中的藻液混于一起，分别倒入4个50ml的离心管里，在离心机中以6000转每分钟的速度离心5分钟，注意离心速度不能过于的快，否则盐藻细胞会破碎导致实验失败。离心结束后，分别去上清液，在两个离心管中加入普通培养基，加至45ml，在另一个离心管中加入三分之一氮含量的培养基，同样加至45ml，在最后一个离心管中加入高盐度培养基，也是一样加到45ml。摇晃每个离心管，直至所有盐藻都溶于培养基中。把每个培养基中的45ml藻液等分成3分，各15ml，分别加到12个锥形瓶里，分别标号1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12。其中4号，5号，6号为三分之一氮的培养基，10号，11号，12号为高盐度的培养基 ，1号，2号，3号，7号，8号，9号为普通培养基，分别作为之前三分之一氮培养基和高盐度培养基的对照组，1号，2号，3号作为三分之一氮培养基的对照组，7号，8号，9号作为高盐度培养基的对照组。由于实验条件有限，摇床灯管长度有限，12瓶锥形瓶无法摆成一列，所以摆成两列，1，2，3，4，5，6为一列，7，8，9，10，11，12为一列，所以光照强度会有差异，会影响盐藻的生长，对于数据测量同样有影响。于每个锥形瓶中取2ml藻液，在紫外分光光度计中测量630nm处的吸光度的值，再各取1ml藻液，在离心机中以6000转每分钟的速度离心5分钟，去上清液，加2ml无水乙醇，在紫外分光光度计中测量450nm，645nm和663nm处的吸光度的值。测量结束后，继续培养，之后每个隔一天测量一次数据，于每个锥形瓶中取2ml藻液，在紫外分光光度计中测量630nm处的吸光度的值，再各取1ml藻液，在离心机中以6000转每分钟的速度离心5分钟，去上清液，加2ml无水乙醇，在紫外分光光度计中测量450nm，645nm和663nm处的吸光度的值。连续测量5次。

2.3 生物产量的测定

因为藻类的细胞生物产量与吸光度的值呈正相关，所以对于盐藻细胞生物产量的测定，我们可以通过测量盐藻的吸光度来测定。盐藻在630nm处有最大吸光度，测量前尽量摇匀，分三组，测量，取平均值。

盐藻细胞干重=0.7512*OD630 0.015

参考文献：周丽花，施翔，程建峰等七种常用培养基对盐藻生长和色素含量的影响，水产科学，2015-12（3）-0750-07

2.4 色素含量的测定

取1ml藻液，加入到1ml离心管中，在离心机中以6000转每分钟的速度离心5分钟，去上清液，加2ml无水乙醇，于紫外分光光度计中测量450nm，645nm和663nm处的吸光度的值。

叶绿素含量计算公式：