论文总字数：17894字

摘 要

目的：本论文建立了孕鼠血浆及组织中洛索洛芬（HR1405-01）及代谢产物的高效液相色谱质谱联用检测方法，而且大鼠血浆方法学已经被完全检验过。结果表明:血浆和大鼠组织样品中HR1405-01的线性范围为5-5000 ng/ml，HR1405-01的最低定量限为5ng/mL，方法的选择性、精密度、准确度、基质效应、稀释可靠性、残留量、稳定性结果均满足检测方法要求，血浆及组织中HR1405-01在-20 ℃冷冻条件下稳定性良好。该方法特异性强、灵敏度高、稳定性好、结果准确，可用于大鼠血浆和组织中HR1405-01含量的测定，满足HR1405-01生物样品毒代动力学研究的要求。

关键词：高效液相色谱质谱法；洛索洛芬；毒性比较试验；血浆及组织中的检测

Study on the toxicokinetics of Loxoprofen in the second stage of reproduction in rats

Abstract

Objective: This paper establishes a high-performance liquid chromatography-mass spectrometry detection method for loxoprofen (HR1405-01) and metabolites in plasma and tissues of pregnant rats, and the rat plasma methodology has been fully tested.Methods: chromatographic column: Poroshell 120 EC-C18 (4.6mm×50mm, 2.7μm, Agilent company); mobile phase: 0.1% formic acid aqueous solution-acetonitrile = Amurb B; column temperature: 4 ℃; flow rate: 0.6 mL; injection volume: 5 μ L. The selectivity, precision, accuracy, matrix effect, dilution reliability, residue and stability of the method met the requirements of the detection method. HR1405-01 in plasma and tissue was stable at-20 ℃.The method has good specificity, high sensitivity, nice stability and accurate results. It can be used to determine the content of HR1405-01 in rat plasma and tissues, and meet the requirements of HR1405-01 biological sample toxicokinetics research.

Key words: HPLC-MS; Loxoprofen; Toxicity comparison test; Detection of plasma and tissue

目 录

摘 要 I

ABSTRACT II

第一章 绪论 1

1.1 洛索洛芬 1

1.1.1 基本信息 1

1.1.2 药代动力学 2

1.1.3 药理作用 2

1.1.4 洛索洛芬的临床应用 2

1.1.5 药物相互作用 3

1.1.6 液质联用技术 3

1.1.7 基于LC-MS的毒代动基本条件 4

1.1.8 研究依据与目的 5

第二章 大鼠血浆及组织中HR1405-01检测 7

2.1 仪器与试剂 7

2.1.1 仪器 7

2.1.2 试剂 7

2.1.3 标准品 8

2.2 HR1405-01检测方法 8

2.2.1 试剂配制 8

2.2.2标准曲线及质控样本（QC）制备 9

2.2.3血浆样品及组织样本处理 10

2.2.4 色谱条件和质谱条件 11

2.3 洛索洛芬毒性试验伴随毒代研究 13

2.3.1 试验设计 13

2.3.2 实验动物 13

2.3.3 毒代样本采集 13

2.3.4 采集方法和采集量 13

2.3.5 生物样本处理 14

2.3.6 血药浓度-时间数据 14

2.3.7 毒代动力学参数 16

2.3.8 组织分布研究 17

2.3.9 结果 21

2.4 讨论 22

2.5 小结 23

第三章 结论与展望 24

3.1 结论 24

3.2 展望 24

参考文献 25

致 谢 27

第一章 绪论

1.1 洛索洛芬

1.1.1 基本信息

洛索洛芬（loxoprofen）名为2-[4-(2-氧代环戊烷-1-基甲基)苯基]丙酸，白或淡黄色粉状结晶体，分子式为C₁₅H₁₈O₃ ，密度为1.18 g/cm³ (20ºC)，熔点为108.5 - 111ºC，沸点为418ºC，常温常压储存。

洛索洛芬为苯丙酸类非甾体消炎药^[1]。该类药物具有抗炎、抗风湿、止痛、退热和抗凝血等作用，多应用于发热和各种疼痛症状的缓解。 其中洛索洛芬的化学结构式如下：

图1-1 洛索洛芬化学结构式

其生产方法为：吡酸乙酯经引入Cl原子、经过Friedel-Craft Reaction,有机官能团（C=O）经迪克曼Aldol Reaction得2-苯甲酰基环戊酮、利用催化剂进行还原反应，接下来与1,2-亚乙基二醇（EG）反应，最后在氧化锌作为反应物的条件下，进行1，2位的简单芳香环衍生出的官能团取代基的Rearrangement Reaction得即洛索洛芬。该路线原料廉价易得、产量稳定、操作简单,适合工业化生产^[2,3]。

1.1.2 药代动力学

本品口服后，在胃肠道很快被吸收^[4,5]，HR1405-01和抗-OH(活性代谢物)很快通过食道进入胃肠吸收入血液中，其中，机体内中的主要脏器，如肾脏、肝脏可检测到高浓度HR1405-01的分布。
　　成人口服60 毫克后，HR1405-01浓度约在30分钟时达到最高峰，-OH代谢产物浓度约为50分钟时达到最高点，HR1405-01通过吸收入血液后，治疗剂量下与血浆蛋白结合的百分率超过95%，而HR1405-01的-OH代谢产物与血浆蛋白结合的百分率超过90%，HR1405-01可与蛋白质大分子高度结合。此后，大部分葡萄糖醛酸或葡萄糖醛酸羟基化结合物通过尿液迅速排出，约50%在口服后8小时内排出。口服给药5天，无蓄积。原型半衰期为1.2h，活性代谢物半衰期为1.3h。

1.1.3 药理作用

用于类风湿性关节炎、骨性关节炎、腰痛、肩周炎、颈肩腕综合征，以及手术后、外伤后和拔牙后的镇痛消炎，急性上呼吸道炎症的解热镇痛等^[6,7,8]。减轻机体炎症反应, 有效改善实验动物关节肿胀^[9，10]。

1.1.4 洛索洛芬的临床应用

强制性脊柱炎

强直性脊柱炎(AS)是一种慢性异常免疫应答的疾病，属于风湿性病范畴^[11]。主要累及脊柱，腰椎纤维环跟其连结的结缔组织纤维化，可导致眼、肺、等重要脏器和肌肉的病变。强直性脊柱炎的早期或轻度临床症状多较为隐匿，也可以表现出体重减轻、贫血、厌食、低烧，严重者会导致颈椎病变，胸椎病变，关节外可表现为眼部病变跟心脏病变，而且持续时间绵长，难以根治，对于16岁~25岁青年，病发几率较高，或不及时诊断、治疗，致残率也相当高，对病患的日常生活跟身体健康都十分有影响，由于初期病情较轻，病患很难及时发现或引起重视，致使病情加重，失去了最佳的治疗时间段。NSAIDs能迅速改善腰部疼痛、背部僵硬等症状，减轻关节疼痛肿胀和活动范围，成为强直性脊柱炎患者的首选药物^[12]。HR1405-01作为苯丙酸类的NSAIDs，临床疗效消炎效果显著,口服治疗30分钟之后血浆的浓度就能够达到峰值,主要适用于治疗类风湿性关节炎、肩周炎、腰痛、强直性脊柱炎等疾病中,具有良好的镇痛和消炎效果^[13,14]。

1.1.5 药物相互作用

与香豆素抗凝剂(华法林)联合使用时，会增强这些药物的抗凝效果，在服用时需要重点、仔细地观察，有风险时需要降低用药次数与剂量。（HR1405-01通过抑制PG合成路径中环氧化酶COX，抑制血栓素前体的生成，可能会产生凝血障碍。

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