论文总字数：17714字

摘 要

目的: 通过使用高效液相色谱法( high performance liquid chromatography，HPLC) 检测硝酸芬替康唑有关物质，以及一系列方法学的验证。

方法: 本实验采用DiamonsilC-18柱（250×4.6mm，5μm）做为色谱柱，以0.2mol/L醋酸铵为流动相A，以乙腈为流动相B对其进行梯度洗脱；根据紫外全扫描结果中波长的较大吸收值，选择本品的测定波长为229nm，进行有关物质的测定。本实验中设计一系列破坏试验对本品主降解产物和分离度进行分析。同时考察并验证了方法的定量限检测限，线性，回收率，稳定性，重复性以及耐用性。

结果: 本实验最终测得的硝酸芬替康唑的三批样品以及对照品的有关物质均在1.0％以内。

结论: 本方法能够有效的检测出硝酸芬替康唑的有关物质，并且能对本品各自降解产物进行分离和控制，杂质回收率好、分离度高、耐用性好、结果准确可靠。

［关键词］ 硝酸芬替康唑; 有关物质; 高效液相色谱法

Study on the Methodology of Fenticonazole Nitrate Related Substances

Abstract

Objective :The detection of fenticonazole nitrate-related substances by high performance liquid chromatography (HPLC), as well as a series of methodological validation.

Methods: Diamonsil C-18 column (250 × 4.6mm, 5μm) was used as the column, 0.2 mol / L ammonium acetate was used as mobile phase A and gradient elution with acetonitrile as mobile phase B. According to the total Scan the results of the larger wavelength of the absorption value, select the product of the measured wavelength of 229nm, the determination of the relevant substances. In this experiment, a series of failure tests were designed to analyze the main degradation products and separation of the product. The limits, linearity, recovery rate, stability, repeatability and durability of the method were also investigated and verified. Results: The final test of the three batches of fenticonazole nitrate and the related substances in the reference substance were within 1.0%.

Conclusions：The method can effectively detect the related substances of fenticonazole nitrate and can separate and control the degradation products of the product. The recovery rate is good, the separation is high, the durability is good and the result is accurate and reliable.

Keywords: Fenticonazole Nitrate; Relative substance; High performance liquid chromatography

目录

摘 要 I

Abstract II

第一章 绪论 1

1.1 硝酸芬替康唑概述 1

1.2 抗真菌药物近几年的研究成果 1

1.2.1 位点在细胞膜上的抗真菌药物 2

1.2.2 细胞壁合成的抗真菌新药 2

1.2.3 通过核酸合成的抗真菌药物 2

1.3 硝酸芬替康唑的适应症和药理作用 3

第二章 实验部分 4

2.1 仪器和试剂 4

2.1.1仪器 4

2.1.2试剂 4

2.2中间体和主要杂质 4

2.3色谱条件的选择 5

2.4溶液的配制 5

2.5系统适用性试验 5

2.5.1检测波长的选择 5

2.5.2流动相的选择 6

2.5.3空白干扰试验 6

2.5.4系统适用性试验 6

2.5.5破坏试验 7

2.5.6定量限与检测限 8

2.6溶液稳定性 8

2.6.1 对照品溶液稳定性 8

2.6.2样品溶液稳定性 9

2.7 重复性 9

2.8回收率 9

2.9耐用性试验 10

2.9.1柱温变化对试验结果的影响 10

2.9.2不同流速对试验结果的影响 10

2.9.3不同色谱柱对试验结果的影响 10

第三章 结果 11

3.1空白干扰试验 11

3.2破坏试验 11

3.3定量限与检测限 11

3.4溶液稳定性试验 11

3.5重复性的试验 12

3.6 回收率试验 13

3.7耐用性的试验 14

3.8样品有关物质测定的结果 15

第四章 实验结论 17

参考文献 18

致谢 20

第一章 绪论

1.1 硝酸芬替康唑概述

硝酸芬替康唑（Fenticonazole nitrate）是一种咪唑类的用于抗真菌的药物,像咪唑类的抗真菌药自从21世纪开始便发展的很快。硝酸芬替康唑对于皮真菌、酵母菌和引起皮真菌病的其它真菌都有效，也可用于治疗皮肤真菌引起的感染。硝酸芬替康唑的化学结构式见图1所示：

图1：硝酸芬替康唑化学结构

1.2 抗真菌药物近几年的研究成果

两性霉素B（Amphotericin B）是人类发现的第一种抗真菌的药物,而从它被发现以来，世界各国在和真菌病的斗争已经有四十多年。21世纪以来,世界各国在预防还有医疗真菌类的疾病尤其是在浅表真菌病这一层次上面已经是取得了十分巨大的成果，此外，近些年来对于深部真菌病的探索也有了一定的成果,但是自从21世纪开始，深部真菌病的发病率以及感染率在一年接一年的快速提高，医疗深部真菌病也变的越来越困难，真菌对医疗的药物变的越来越免疫，现有的治疗药物的也存在很大的毒副作用，这种种的不利性的因素，导致了世界各国的科研人员依旧在马不停蹄的找寻探索着那些更加高速有效、毒性作用很低的没有被人们发现的新种类的抗真菌药物。

而自从21世纪开始,抗真菌药物的探究与研发已经是取得了无比丰硕的许多的新成就。而如今在临床上面经常使用的抗真菌的一类药物，还有一部分正在研究制作中的新的药物，区别出它们作用位点，可分下面的几种：

1.2.1 位点在细胞膜上的抗真菌药物

麦角固醇（Ergosterol)其它别名也叫麦角甾醇。它在真菌细胞膜里，能在生物中部分菌丝体中提取，麦角固醇能有效维持细胞膜流动性，对生物调节可发挥作用。全世界人们可以通过各种途径去压制麦角固醇的合成，可以十分有成效的控制并且消灭掉真菌，从而起到了抗真菌的作用。

1.2.2 细胞壁合成的抗真菌新药

真菌细胞壁是真菌特有的细胞器，真菌细胞壁能够维持细胞成长、细胞正常生理方面性能，是抗真菌药物一种有着新作用的靶点。此外，真菌细胞壁这种细胞器它含有的主要物质有很多，辟如：β -葡聚糖（β-glucan）、甘露糖蛋白（mannoprotein）、壳多糖（Chitin）等一些组成成分。而我们可以抑制或干扰这些主要物质的合成，于是便能显著的控制甚至可以杀死灭掉这些真菌。像这样一类的药物主要有脂环肽类（Alicyclic peptides）、尼可霉素（Nicotinomycin）、普拉霉素（Plasmacillin）等药物。

1.2.3 通过核酸合成的抗真菌药物

氟胞嘧啶（Flucytosine）是一种抗深部真菌的药物，人们通过胞嘧啶透性酶和胞嘧啶脱氨基酶的结合吸收，做成了 5 -氟尿嘧啶（5-Flucytosine）。通过尿嘧啶核苷焦磷酸酶这种酶的作用，结合并吸收最终做成了5 -单磷酸氟代去氧尿嘧啶（5-Monophosphate fluorodeoxyuridine），5 -单磷酸氟代去氧尿嘧啶可以抑制脱氧核糖核酸的合成。通过核酸合成的这些药物只是对于念珠菌（Candida）还有新型隐球菌（Cryptococcus）是有成果的。而在人体的组织器官内，由于缺有胞嘧啶脱氨基酶，所以该药对此没有多大的作用。氟胞嘧啶拥有可溶于水，并且它的吸收率很高，它的副作用的反应也比较少等一些特点。大部分的丝状真菌也都缺乏胞嘧啶脱氨基酶等一些比较重要的酶。

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