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摘 要

中药是中华名族的宝贵财富，古往今来，它在与疾病的斗争的过程中起到了举足轻重的作用。人们对灵芝所具有的生物活性作用及其机理不断研究，发现它拥有提升人体免疫力，并且具备抵抗肿瘤细胞的作用。李时珍在《本草纲目》中也写到：赤芝，苦平无毒，主治胸中结、益心气、补中、增智慧、不忘；紫芝，甘温无毒，好颜色、治虚劳、治痔^[1]。灵芪有很多蛋白质，其中一个是灵芪多糖，临床研究灵芪多糖具有显著的药理活性和生物活性，对其进行优化配置。研究发现，这项实验中，灵芪多糖的响应进行优化的方法，有助于研究和开发。本课题在优化灵芪多糖提取条件的基础上进行了以下研究工作：

1.参考现有文献报道，确定了灵芪多糖的有效成分的提取和检测方法。

2.液体与固体比例，温度，提取时间，换水次数得到的多糖是受影响的，对这四个影响因素的研究最终确定了液料比为1:29.57，温度为90.62℃，提取时间为2.83小时，提取次数为2.45次。

关键词：灵芪多糖 提取条件 响应面法 优化

Optimization of extraction conditions of Polysaccharides from Ling Ling by Response Surface Methodology

Abstract

Traditional Chinese medicine is the precious treasure of the Chinese people. It has played an important role in the struggle against disease. People have studied the biological activity and mechanism of Ganoderma lucidum and found that it has the function of enhancing human immunity and resisting tumor cells. Li Shizhen also wrote in the "Compendium of Materia Medica": Ganoderma lucidum, bitter flat non-toxic, attending chest knot, Yixin gas, wisdom, fill in, not forget; Rosie, with non-toxic, good color, treatment of asthenia, treatment of hemorrhoids [1]. There are many proteins in Ganoderma lucidum polysaccharides, one of which is Ling Qi polysaccharide, and clinical study of it has significant pharmacological activity and biological activity, and optimized its configuration. The study found that in this experiment, an optimized method for the response of polysaccharides to polysaccharides was helpful for research and development. In this study, the following research work was carried out on the basis of optimizing the extraction conditions of polysaccharides:

1. referring to the existing literature reports, the extraction and detection methods of the effective components of the polysaccharides were determined.

2. liquid and solid ratio, temperature, extraction time, polysaccharide numbers of water changing are affected, the four factors ultimately determine the ratio of material to liquid 1:29.57, the temperature is 90.62 DEG C, the extraction time is 2.83 hours, 2.45 times of extraction.

Key Words: Ling Qi polysaccharide；extraction conditions,；response surface methodology,；optimization

目 录

摘要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1 灵芝 1

1.1.1 灵芝多糖 1

1.1.2 灵芝三萜类化合物 1

1.1.3 蛋白质、多肽、氮基酸 1

1.2 黄芪概述 1

1.2.1 黄芪多糖 2

1.2.2 黄芪皂苷类药理作用 2

1.3 双向发酵 2

1.4 响应面法研究综述 2

1.5 研究意旨 3

第二章 灵芪多糖发酵条件的优化 4

2.1 实验材料 4

2.1.1 实验试剂 4

2.1.2 实验仪器与设备 4

2.1.3 培养基 5

2.2 实验方法 5

2.2.1 灵芪多糖有效成分的提取 5

2.2.2 灵芪多糖含量的测定 5

2.2.3 灵芪多糖标准曲线的绘制 6

2.3 灵芪固体发酵条件的优化 6

2.3.1 培养温度的确定 6

2.3.2 发酵周期的确定 7

2.4 小结 8

第三章 响应面法优化灵芪多糖提取条件 9

3.1 仪器和材料 9

3.1.1 实验主要试剂 9

3.1.2 设备与仪器 9

3.2 实验方法 10

3.2.1 发酵产物的预处理 10

3.2.2 主要试剂的配制 10

3.3 葡萄糖标准曲线 10

3.4 灵芪多糖含量的测定 11

3.5 提取条件对灵芪多糖含量的影响 12

3.5.1 单因素实验 12

3.5.2 响应面法优化灵芪多糖的提取工艺 14

3.6 结果与讨论 20

3.6.1 黄芪多糖样品检测结果 20

3.6.2 运用响应面法优化灵芪多糖提取条件的结论和结果 20

第四章 结论与展望 21

4.1 结论 21

4.2 展望 21

参考文献 22

致谢 24

文献综述

1.1灵芝

灵芝作为一种保健药材，自古以来都颇受推崇，已成为人们保健的首选之物。它丰富的活性成分，成为人们研究探讨的关键。

1.1.1 灵芝多糖

灵芝多糖是灵芝中重要的成分之一，其功效也举足轻重，并且通过调查发现在当今保健品市场，灵芝多糖已成为一种畅销品。灵芝多糖的活性之一的抗氧化活性，是其成为畅销品的重要原因，也可作为天然抗氧化原料。我们用热水提取、乙醇提取灵芪多糖，我们采用的实验是传统的热水提取，随着提取技术的发展，新的方法，如液相色谱法，超声波测试方法等。原料的提取方法不同，则所提出产物药理活性、提取率就会不一样，产生的结果就不同^[2]。

1.1.2 灵芝三萜类化合物

通过对三萜类化合物的生物活性进行了研究，已经分离出130多种，主要具有提高免疫力、排毒、降血压等药理作用。三萜类化合物的提取一般有三种方法：第一种方法是按一定比例的甲醇，乙醇作为初始物，再进行分离；另一种是甲醇，乙醇，所得到的产品，溶剂萃取法碱处理，然后分别进行分离；第三种方法是使用的衍生物的制备方法分离的^[3]。

1.1.3 蛋白质、多肽、氮基酸

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