论文总字数：14674字

摘 要

骨肉瘤，属于恶性肿瘤的一类，通常原发自骨髓里的高恶性肿瘤，它的特点为肿瘤细胞的增长繁殖直接引发骨骼或骨样组织的形成。骨肉瘤具有复发性疾病或肺转移的现象，是比较多见的骨原发恶性肿瘤，世界上有很多患者的死亡由它引起。在本课题探讨中，我们知道蓝萼甲素可以通过抑制细胞活力来抑制骨肉瘤细胞。我们采用MTT检测法确定低、中、高三种浓度（2.5、5、10μM）的蓝萼甲素；一般通过AnnexinV/PI双染法来考察蓝萼甲素对体外HOS细胞凋亡率的影响；另外，不仅这样，我们还在机制方面研究了蓝萼甲素对细胞内线粒体凋亡通路的影响。实验结果显示，蓝萼甲素对于人体骨肉瘤HOS细胞有良好的的促进细胞凋亡的作用，所以，激活线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡可以通过一些步骤，类似于激活caspase-3，提高Bax/Bcl-2的比例等，来诱导骨肉瘤细胞凋亡。结果显示，蓝萼甲素可以通过线粒体凋亡途径诱导骨肉瘤细胞凋亡。所以，蓝萼甲素可能是未来临床应用中人骨肉瘤的潜在和有效的候选物。

关键词：蓝萼甲素 骨肉瘤 凋亡

Abstract

Osteosarcoma, a class of malignant tumors, usually from the bone marrow of the high malignant tumor, which is characterized by the growth and reproduction of tumor cells directly lead to the formation of bone or bone-like tissue. Osteosarcoma with recurrent disease or lung metastasis phenomenon, is more common bone primary malignant tumor, the world has a lot of patients caused by the death of it. In this study, we know that blue calixin can inhibit cell viability to inhibit osteosarcoma cells. We used MTT assay to determine the low, medium and high concentrations of three (2.5,5,10μM) of the blue calixin; generally through AnnexinV / PI double staining method to investigate the effect of blue calamine on the apoptosis rate of HOS cells in vitro In addition, not only that, we also studied the effect of blue calixin on intracellular mitochondrial apoptosis pathway. Experimental results show that the blue calixin for human osteosarcoma HOS cells have a good role in promoting apoptosis, so activation of mitochondrial apoptosis pathway induced apoptosis can be achieved through a number of steps similar to activation of caspase-3, increased Bax / Bcl-2 ratio, etc., to induce osteosarcoma cell apoptosis. The results showed that the blue calyx A can induce the apoptosis of osteosarcoma cells through the mitochondrial apoptosis pathway. Therefore, blue calyx may be a potential and effective candidate for human osteosarcoma in future clinical applications.

Key words: blue calyx monosarcoma tumor apoptosis

目 录

摘要 I

Abstract II

目 录 III

第一章 文献综述 1

1.1 引言 1

1.2 蓝萼甲素的药理作用 1

1.2.1 抑菌抗炎作用 2

1.2.2对免疫反应的作用 2

1.2.3 对肝损伤的保护作用 2

1.3 蓝萼甲素对癌症细胞株的作用 3

1.4 线粒体凋亡通路 3

1.5 研究方法 4

第二章 材料和方法 4

2.1 材料与仪器 4

2.1.1 实验仪器 4

2.1.2 药品与试剂 5

2.2 细胞培养与药物配制 5

2.3 实验方法 5

2.3.1 MTT法检测蓝萼甲素对HOS细胞存活率的影响 5

2.3.2 蓝萼甲素对体外HOS细胞凋亡率的影响 6

2.3.3 蓝萼甲素对细胞内线粒体凋亡通路的影响 6

第三章 结果与讨论 7

3.1 实验结果 7

3.1.1 蓝萼甲素对细胞株存活率的影响 7

3.1.2 蓝萼甲素对体外HOS细胞凋亡率的影响 8

3.1.3 蓝萼甲素对细胞内及线粒体凋亡通路的影响 9

3.2 讨论 10

3.3 结论 11

参考文献 12

致 谢 15

第一章 文献综述

1.1 引言

骨肉瘤，属于自发性恶性肿瘤的一类，源自于骨间叶的细胞，特点为肿瘤细胞的增长繁殖直接引发骨骼或骨样组织的形成。在医学上，典型骨肉瘤非常罕见，发病率大概占0.3万/年，是自发骨肿瘤的15%^[1]，恶性肿瘤的0.2%。80%~90%发自胫骨近端、肱骨近端和股骨远端^[2]。肺转移是病人死亡的主要因素。于20世纪70年代前，截肢手术是一种没有转移性肢体骨肉瘤治疗的一般方法，患者在被确定诊断时候已经患有微小转移灶，其五年死亡率大于80%^[3]。在最近几年间，伴随外科技术、化疗、骨骼重建等迅速开展，截肢已为骨肉瘤肢体抢救治疗逐渐取代，倾向于保肢手术的病人有80% 以上，五年整体死亡率降低至25%~45%^[4]。研究表明，在过去的十年中，我国骨肉瘤患者的平均存活率为64%，5年无瘤生存率为56%^[5]。对于现今骨肉瘤的治疗，特别是晚期骨肉瘤，一般采用化疗手段来治疗。临床上采用的骨肉瘤化疗药物有5-氟尿嘧啶、丝裂霉素等^[6-7]，因此类药物靶向作用较小，在药物进攻癌细胞的同时，正常的免疫细胞也会造到攻击，会出现各种副作用，使人体抵抗力下降，还会导致肝脏中毒、消化困难、心脏毒性等严重的副作用反应^[8]。所以，当基因治疗、细胞靶向治疗等医学技能的开展，急需在骨肉瘤的治疗中寻找一种全新途径。

多项实验表明许多中药拥有治疗肿瘤的功能，能在肿瘤出现、扩散的多个环节上有治疗作用，具有多靶点、多环节、多效应的特征^[9]，这是最近几年研发探讨的重要项目^[10-12]。基于骨肉瘤治疗现状，本课题对大量的药物单体进行筛选，了解到蓝萼甲素使肿瘤细胞线粒体凋亡通路发生激活，产生显著引发肿瘤细胞死亡的疗效。

1.2 蓝萼甲素的药理作用

蓝萼甲素为20世纪80 年代由许云龙教授团队在蓝萼香茶菜中提炼到新二萜化合物，并且是很特别的15-氧-16-贝壳杉烯^[13]。蓝萼甲素具有治疗肿瘤、杀死细菌、引发细胞凋亡、抗氧化、DNA损伤维护和细胞毒作用等大部分生物活性^[14]。现有报道证明，蓝萼甲

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