论文总字数：17017字

摘 要

本文的目的：旨在对化学物质度骨化醇的一些含量建立一个测定方法，在对其进行这方面的测定的时候会用到高效液相色谱法这一个方法来对度骨化醇进行研究。方法：色谱柱：Agela Venusil XBP C₁₈ （250*4.6mm），流动相：水（磷酸调PH至3.0）—乙腈（10：90），柱温：室温，流速：2ml/mi n，进样量：20µl。实验结果显示度骨化醇在1.04475μg/ml-104.475μg/ml的范围内浓度与峰面积呈现出很好的线性关系，线性方程具体表现为：Y=264.57x 145.32，r=0.9998。度骨化醇溶液在8h 内稳定性优良，相对标准偏差(RSD)%为1.90%；精密度良好，RSD为1.68%。重复性良好，RSD为1.66％。度骨化醇能极好的溶于水（水加磷酸调节PH至3.0）-乙腈溶液（10:90），而且稳定性非常棒，为该药物做高效液相色谱法的含量测定提供了可行性。结论：该测定方法简洁、精确、可靠，适合用作度骨化醇注射液的含量测定。

关键词：高效液相色谱法 度骨化醇注射液 方法学研究 含量测定

Content Determination of Doxercalciferol in Injection of Doxercalciferol

Abstract

Objective : This paper established a method for content determination of Content Determination of Doxercalciferol in Injection of Doxercalciferol, determination of the research and methodologies by high performance liquid chromatography. Methods : Chromatographic separation was achieved on an Agela Venusil XBP C₁₈ （250*4.6mm）, using a mobile phase consisting of water(Phosphate adjusted to pH 3.0)-Acetonitrile(10:90, v/v) at a flow rate of 2.0mL/min.the temperature of the column was indoor temperature , injection volume was 20ul. The linear calibration curves were obtained in the concentration range of 1.04475-104.475ug/ml with the regression equation: y = 264.57x 145.32 r = 0.9998. Doxercalciferol was stable at 8 hours and RSD was 1.90％.It’s precision is good and the RSD is 1.68%. Reproducibility was good, RSD was 1.66%. The ossylated alcohol can be well dissolved in water (water plus phosphoric acid to pH 3.0) - acetonitrile solution (10:90), and the stability is very good,what provides the possibility of determining a high property liquid phase.Conclusion : This method is simple , accurate and effective for content determination and it is suitable for the content determination of dexlansoprazole in injection of dexlansoprazole.

Key words:HPLC;injection of Doxercalciferol; Methodology study;Content determination

目录

摘 要 I

Abstract II

第一章 度骨化醇注射液的综述 1

1.1 度骨化醇 1

1.1.1度骨化醇的基本信息 1

1.1.2药物代谢动力学和药理的相关知识 2

1.1.3 度骨化醇临床应用 3

1.1.4常用含量测定方法 5

1.1.5度骨化醇的含量测定 5

1.2 研究依据与目的 6

第二章 度骨化醇注射液的含量测定 7

2.1 仪器与试剂 7

2.1.1 仪器 7

2.1.2 溶剂 7

2.1.3 供试品与对照品 8

2.2 测定方法 8

2.2.1 溶液的配制 8

2.2.2 色谱条件 8

2.3方法学研究 8

2.3.1系统适用性实验 10

2.3.2线性关系研究 11

2.3.3稳定性实验 11

2.3.4重复性实验 12

2.3.5精密度实验 13

2.3.6回收率实验 14

2.3.7均一性实验 15

2.4 含量测定 16

2.5讨论 17

2.6小结 18

第三章 结论与展望 19

3.1 结论 19

3.2 展望 19

参考文献 21

致 谢 22

第一章 注射用度骨化醇的综述

1.1度骨化醇

度骨化醇是hectorol中含有的活性成份，即合成维生素D ₂类似物1α，25-二羟基维生素D ₂（1α，25-（OH）₂D₂），是经过体内代谢活化而产生的天然存在的生物活性形式的维生素D₂,分子式C₂₈H₄₄O₂,相对分子质量412.65。由美国Bone Care International公司研制,已经被FDA批准进入市场,主要用于治疗骨质疏松症、继发性甲状旁腺功能亢进症(SHPT)等病症^[1]。度骨化醇是首个被用于治疗SHPT适应症的维生素D₂类似物,拥有非常良好的发展前景,同时当下正在进行度骨化醇治疗前列腺癌、结肠癌和乳腺癌的中期临床研究,并且最近有研究显示,度骨化醇对骨髓增生异常综合症(myelodysplasticsyndrome,MDS)、慢性单核细胞性白血病(my-elomonocyticleukemia)等癌症具有一些治疗效果^[2]。度骨化醇能明显的调节慢性肾病患者的血清 iPTH 水平，骨更新以及成纤维细胞生长因子-23，是阿尔法骨化醇和 1α，25-（OH）₂D₂的升级换代产品^[3]。

1.1.1度骨化醇（Doxercalciferol）的基本信息

图1 结构式

1.1.2药物代谢动力学和药理的相关知识

在对骨质疏松等症状进行治疗的时候会用到阿尔法骨化醇、度骨化醇这些类似的维生素的一些药物。而这些患者当中患有继发性甲状旁腺功能亢进症状的就会用到度骨化醇这一类维生素，因为这一类维生素对人体本身没有太大的副作用^[4]。度骨化醇不但能加强钙磷吸收增加骨强度，而且能使癌细胞凋亡、控制癌细胞转移等^[5]。度骨化醇在人体的血液当中会与人体当中的肝脏周围的一些微粒体比如25-羟基化酶这些相互作用从而发生一些反应。这一种可以被羟基氧化，接着维生素D₂就会与该酶当中的受体进行结合，从而在身体当中发生相应的反应来达到治疗骨质疏松等症状，使癌细胞消亡、控制癌细胞扩散等作用^[6]。

度骨化醇在人体当中被人体吸收有两种方式，一种是直接口服，另一种是可以通过注射的方式进行吸收。度骨化醇进入人体之后会和人体的肝脏反应，被其中的cyp27进行激活，就会产生主要的代谢物。度骨化醇被激发活性与肾脏无关^[7]。1α，25-（OH）₂D₂的平均消除半衰期约为（34±14）h。血透构成里，该产物仍然在血液中^[8]。

1.1.3度骨化醇临床应用

1.治疗慢性肾病和继发性甲状旁腺功能亢进症

在大多数人当中，一般患有慢性肾病的人都是身体当中对维生素D缺乏导致^[9]。 而患了该病的人会在一定程度上影响着甲状腺功能亢进的功能，在这一方面就不只是缺乏维生素这一个病因引发患上该病，还会表现出度骨化醇以及磷的代谢平衡以及在人体肌肉组织这一块也会对PTH进行抵制^[10]。刚开始慢性肾病患者甲状旁腺亢进治疗时一般会补充骨化醇以及维生素D，它们必须通过肾脏变成1α，25-（OH）₂D₃才能激发用途，因为慢性肾病患者失去了大部分的肾功能，所以可能存在治疗效果不尽如人意的问题。然而最近有研究表明骨化醇以及维生素D₃在肾外组织同样能变成1α，25-（OH）₂D₃^[11]。度骨化醇会有选择性的和维生素D受体反应。与1α，25-（OH）₂D₃相比，静脉注射度骨化醇会更少产生有持续性的高血钙和高血磷，从而更迅速更长期地控制甲状旁腺素^[12]。当人身体当中

的类似维生素D的物质的侧链有什么改变或者是遭受到破坏，就会很难与身体当中的维生素蛋白相结合，这样的后果是人体中对该类似物质的清理很简单，也容易导致该物质与人体当中的靶细胞相结合^[13]。同时，度骨化醇比1,25双氢维生素D₂带来更多安全性、有效的控制住院率和减少了住院时间。度骨化醇通常用来调节慢性肾病患者血清iPTH水平，拥有非常好的治疗效果和比较小的副作用，在临床应用上前途广泛^[14]。

2.治疗骨质疏松症

人体当中骨的质量以及身体中骨的密度在降低的时候，就会对骨骼当中的一些结构造成相应的破坏，使得骨头的生理机能降低^[15],同时也降低了骨头当中的矿物质成分和骨骼当中的有机成分，导致其脆性上升和强度下降，因此更可能引发骨折的全身性骨骼疾病^[16]。在老年人当中换上骨质疏松症状的几率要比中少年患病几率要大一些，换上骨质疏松主要表现出来的症状是胸部以及腰部或者是全身性的疼痛感^[17]。当老年人患上该病之后其骨头当中的骨质结构会遭受到一定的破坏，骨密度的下降主要是由于身体对钙盐的吸收有所减少，也会使得骨头的脆性变强，这样导致的后果就是很容易有骨折事件的发生。目前我国人口呈现出老龄化的趋势，骨质疏松这一症状在我国也很常见，在生活当中对我国老龄人口造成了一定的困扰^[18]。度骨化醇能够预防骨量的丢失，有效的增加骨密度，大大缓解肌力降低状况，显著降低骨折发生率。度骨化醇在这一个方面表现的机理是可以对人体当中的甲状腺细胞的增值进行控制，从而就可以相应的减少人体对甲状腺激素的分泌，同时对促进人体小肠的吸收也有很大的作用，就可以适当的提高血液当中的钙含量，对身体的PTH进行反馈控制 ^[19]。

1.1.4常用含量测定方法

对度骨化醇的含量进行测定的方法包括气相色谱法、络合滴定法等^[20]。其中高效液相色谱是液相色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析^[21]。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。高效液相色谱法有“四高一广”的特点：压强高、速率高、效率高、对物质的灵敏度检测也高，并且其应用于很

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