论文总字数：19665字

摘 要

斑马鱼繁殖力强且发育周期短，体外受精，胚胎透明，与人类基因同源性高达87％，信号通路、生理结构及功能等均与哺乳动物类似，已经成为备受亲睐的脊椎生物模型。斑马鱼不仅被广泛应用于遗传学和发育生物学研究，而且在药物毒性与安全性评价、疾病模型构建及药物筛选方面也有应用。在许多生理和病理过程中，血管生成扮演着重要角色。许多研究表明，血管生成对肿瘤的生长和转移意义重大，故血管新生靶向研究现已成为抗肿瘤治疗的热点。杜鹃素是满山红和其他杜鹃属药用植物中的一种重要的有效成分，主要药理作用是镇咳、祛痰、平喘抗炎、抗肿瘤等。本研究利用转基因荧光斑马鱼体内动物模型对杜鹃素类的三个化合物Msh-1、Msh-2、Msh-3的血管新生抑制活性及毒性进行探究与评价，以血管新生抑制指数(AI)代表化合物的活性与毒性之比。结果表明，MSH-1与MSH-2对斑马鱼产生的毒性最强（LC₅₀最低），但同时其抑制肠下网血管生成的活性虽然在较低的浓度即开始显现，但选择性较差。MSH-3增加了羟基使其毒性大大降低（LC₅₀为53.8μM），但同时羟基的引入并未明显降低其活性，在转基因斑马鱼模型上进行血管新生评价，发现其半数有效浓度EC₅₀介于MSH-1与MSH-2之间，因此，安全浓度增加同时有效浓度并未增加，使得MSH-3在三个化合物中血管抑制活性最大。

关键词：杜鹃素系列化合物 血管新生 斑马鱼模型 活性评价

Evaluation Based on angiogenesis inhibitory activity farrerol series of compounds zebrafish models

Abstract

Zebrafish has been increasingly considered as an important vertebrate model for its high productivity, short period of production, capability of external fertilization, transparent embryo, high homology (87%) with human genome, as well as the similarity in signaling pathways and physiological structures and functions with mamalian animals. Zebrafish has been not only used in developmental and genetic biology studies but also in the evaluation of drug toxicity and safety, disease modeling and drug screening.Quantities of studies have showed that there is a close correlation of angiogenesis with the growth and transfer of tumors as angiogenesis plays an important role in the physiological and pathological processes. Therefore the study of targeting angiogenesis has been paid more attention in antineoplastic therapies.Farrerol is red mountains and other Rhododendron an important medicinal plants of active ingredients, mainly pharmacological effects are cough, phlegm, asthma anti-inflammatory, anti-tumor, and so on. In this study, transgenic fluorescent zebrafish animal model for three compounds farrerol class Msh-1, Msh-2, angiogenesis Msh-3 inhibitory activity and toxicity of exploration and evaluation to angiogenesis inhibition index (AI) on behalf of the ratio of active and toxic compounds.The results showed that the toxicity of MSH-1 and MSH-2 produced the strongest zebrafish (LC50 lowest), but its suppression of intestinal net angiogenic activity, although that is beginning to show in lower concentrations, but poor selectivity. MSH-3-hydroxy it adds greatly reduced toxicity (LC50 is 53.8μM), but at the same time introducing a hydroxyl group did not significantly reduce the activity of angiogenesis were evaluated on transgenic zebrafish model, found that the median effective concentration EC50 between MSH between 1 and MSH-2, therefore, safe concentration while increasing the effective concentration did not increase, so that the value of MSH-3 AI maximum of three compounds.

Key Words:Farrerol series compound; Angiogenic; Zebrafish Model; Activity Evaluation

目 录

摘要 I

Abstract II

第一章 综述 1

1.1杜鹃素的化学结构与理化性质 1

1.1.1杜鹃素的植物来源 1

1.1.2杜鹃素的化学结构与理化性质...............................................................................2

1.1.3杜鹃素的药理活性.................................................................................................................3

1.2斑马鱼模型在药物筛选与活性评价中的应用 3

1.2.1斑马鱼简介 3

1.2.2斑马鱼的养殖与繁育 3

1.2.3斑马鱼模型在药物筛选中的应用 4

1.2.4斑马鱼在药物筛选中的优势 4

1.3血管新生在药物研究中的地位 5

1.3.1血管新生概述 5

1.3.2抑制血管新生能够对多种疾病起到治疗作用 5

1.3.3 血管新生的研究模型 5

1.3.4血管新生抑制剂的研究进展 7

1.4转基因斑马鱼模型在抗血管生成药物筛选中的应用 8

第二章 基于斑马鱼模型的杜鹃素系列化合物的血管新生抑制活性评价 9

2.1实验材料 9

2.1.1待测药物结构 9

2.1.2斑马鱼.......................................................................................................................9

2.2 实验方法 10

2.2.1斑马鱼毒性实验 10

2.2.2 斑马鱼血管新生抑制实验 10

2.3结果 10

2.3.1三种杜鹃素衍生物对斑马鱼的毒性作用 10

2.3.2 三种杜鹃素衍生物对斑马鱼的血管新生抑制作用 11

2.4讨论 15

第三章 总结 17

参考文献 18

致谢..............................................................................................................................................20

第一章 综述

癌症是致死率极高的一类疾病，是我国人口死亡的主要原因之一，现在治疗癌症的主要方法是化疗，但是治疗效果并不是特别好，主要是由于选择的化疗药物毒副作用，代谢快，治疗指数低等缺点。化疗容易产生多药耐药，从而使肿瘤化疗的效果不理想。由于肿瘤的生长与转移与血管生长关系密切，所以通过抑制血管的新生抑制肿瘤生长已经成为肿瘤治疗研究的一个热点。

血管生成是一个身体的新血管组织的形成过程，在癌症的发展中，月经周期的形成^[1]，类风湿关节炎^[2]、哮喘^[3]和慢性炎症^[4]等生理病理过程中发挥着重要作用。杜鹃素是满山红和其他杜鹃属药用植物中的一种重要的有效成分，可以人工合成。主要用于慢性支气管炎的治疗。主要药理作用是镇咳、祛痰、平喘抗炎、抗肿瘤等。

1.1药物介绍

1.1.1杜鹃素的植物来源

兴安杜鹃(Rhododendron dauricum L.)又名达子香、满山红，为杜鹃花科杜鹃属半常绿多分枝灌木。高1~1.5m，叶片为长圆形或卵状长圆形，长1~5cm宽1~1.5cm。花1~4朵，开于顶端，紫红色，花冠呈宽漏斗状，雄蕊10枚。果长圆形，灰褐色，先端开裂，花期5~6月，果期7~8月。生于山脊、山坡、河岸边及岩石裸露地上，主要分布于我国东北，大兴安岭，长白山区等^[5]。

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