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摘 要

本文主要采用高效液相色谱法（HPLC）检查替莫唑胺原料有关物质。色谱条件经优化确定为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相为：甲醇-己烷磺酸钠溶液（取己烷磺酸钠0.94g，加0.5%冰醋酸溶液溶解并稀释使成960ml，混匀） (40: 960)，流速为1.0ml/min，检测波长为270nm。替莫唑胺质量浓度在0.7~11.0μg/ml内，线性关系良好。本方法简洁、灵敏、重现性好，可用于替莫唑胺原料有关物质的检测。

关键词：替莫唑胺 有关物质 高效液相色谱法

Abstract

Use HPLC check temozolomide relevant material. The material conditions, the optimization method is determined, Eighteen alkyl silane bonded silica as filler, Mobile phase: methanol - hexane solution of sodium (sodium hexane take 0.94g, 0.5% acetic acid solution to dissolve and dilute to make into a 960ml, mix) (40: 960) , the flow rate was 1.0ml/min, the detection wavelength was 270nm. The linear calibration curves obtained in the concentration range of 0.4~11.0μg/ml. This method is convenient,accurate,reproducible and suitable for the determination of the related substances in the temozolomide.

Keywords:temozolomide relevant material HPLC

目录

摘要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1替莫唑胺简介 1

1.2本课题的研究背景 1

1.3杂质研究的意义 2

第二章 有关物质 2

2.1实验部分 2

2.2结果 3

2.2.1专属性 6

2.2.2破坏试验 7

2.2.3定量限、检测限的确定 8

2.2.4样品溶液稳定性试验 9

2.2.5线性 8

2.2.5.1杂质贮备液配制 8

2.2.5.2线性 9

2.2.6进样精密度试验 12

2.2.7混合对照溶液稳定性 12

2.2.8重复性试验 13

2.2.9回收率试验 13

2.2.10中间精密度试验 14

2.2.11有关物质检测 15

2.3讨论 21

2.3.1色谱条件选择 21

2.3.2色谱条件优化 21

第三章 结论 24

参考文献 26

致谢 28

第一章 文献综述

1.1替莫唑胺的简介

替莫唑胺（temozolomide），化学名：3，4-二氢-3-甲基-4-氧代咪唑并［5，1-d］-1，2，3，5-四嗪-8-酰胺。结构式：

性状：为白色或浅棕色/淡粉色粉末，相对分子质量为194.15。pH＜5下稳定，pH＞7时易分解，因此可口服给药。

替莫唑胺用于治疗成人顽固性多形性成胶质细胞瘤^[1]，于1999年8月11日通过FDA批准，在美国上市^[2]。替莫唑胺为咪唑并四嗪类具有抗肿瘤活性的烷化剂。替莫唑胺不直接发挥作用，在生理pH条件下经非酶途径快速转化为活性化合物 MTIC[5-(3-甲基三氮稀-1-)咪唑-4-酰胺]，MTIC主要通过DNA鸟嘌呤的O6和N7位点上的烷基化（甲基化）发挥细胞毒作用^[3]。替莫唑胺对体外细菌有致突变作用（Ames试验），对哺乳细胞染色体有致裂变作用（人外周血清淋巴细胞试验）。本品主要的不良反应包括恶心、呕吐、倦怠和血液学反应^[4]。恶心、呕吐、头痛和倦怠的发生频率最高。这些不良反应通常为NCI^[5]通用毒性标准(NCI common toxicity criteria，CTC)1或2级(轻至中度)，且为自限性，用止吐药即可控制恶心和呕吐。重度恶心和呕吐(CTC3或4级)的发病率分别为10%和6%。骨髓抑制为剂量限制性不良反应，通常在治疗的第一个周期发生，不累积^[6]。

丙戊酸可使替莫唑胺的清除率降低约5%^[7]。雷尼替丁不会改变替莫唑胺和MTIC的Cmax或AUC。同时给予地塞米松、普鲁氯哌嗪、苯妥英、卡马西平、奥丹亚龙、H2受体拮抗剂或苯巴比妥，对口服替莫唑胺未见影响^[8]。

1.2本课题研究的背景

癌症被称为人类的第一大杀手，其中恶性的胶质细胞瘤由于深入神经细胞深处，手术不可能全部切除，复发率100% ，必须结合放疗和化疗进行控制^[9]。传统的烷化剂到达肿瘤局部的浓度较小，并易出现严重的造血功能抑制和胃肠道反应。替莫唑胺( Temozolomide，简称TMZ)^[10,11]是近年来出现的一种治疗脑胶质瘤的新药，其优点是具有较宽的抗肿瘤谱、可口服、易于透过血脑屏障、安全、与其他药物没有叠加毒性、可用于对亚硝基脲耐药的患者，因而引起广泛关注。替莫唑胺不仅对脑胶质瘤有较好疗效，对白血病、黑色素瘤、淋巴瘤和实体瘤也有较好的疗效^[12]。它由英国癌症研究战略技术公司开发，2008 年在中国上市^[13]。

1.3杂质研究的意义

有关物质主要是在生产过程中带入的起始原料、中间体、聚合体、副反应产物，以及贮藏过程中的降解产物等^[14]。有关物质研究是药品质量研究中关键性的项目之一，其含量是反映药品纯度的直接指标。对药品的纯度要求，应基于安全性和生产实际情况两方面的考虑，因此，允许含限定量无害的或低毒的共存物，但对有毒杂质则应严格控制。毒性杂质的确认主要依据安全性试验资料或文献资料。药品中的杂质按其理化性质一般分为三类:有机杂质、无机杂质及残留溶剂。有机杂质包括工艺中引入的杂质和降解产物等，可能是已知的或未知的、挥发性的或不挥发性的。由于这类杂质的化学结构一般与活性成分类似或具有渊源关系，故通常又可称之为有关物质。可以根据主成分的吸收光谱，来判断有关物质的存在^[15]。因为只要是主成分的衍生物，一般都会具有相同的吸收光谱。有关物质又可以分为两种，一是杂质，另一种是降解物。对于有关物质的探讨，一般以原料药来做加速分解。分析加速分解化合物的时候必须与原料药对照来比较，从而确定杂质以及降解物。一般加速分解的情况有高温，酸，碱，氧化，光分解实验^[16,17]。高温可以使用60度或40度，酸碱的浓度是0.1％，氧化是用双氧水，可用0.1％的浓度。光分解一般是在紫外线及一般萤光在一定的能量范围内照射样品。对于化学原料药或成品做化学反应，必须将样品溶于液体，因此必须选择适当的溶剂。对于不溶于水的样品，可以选择甲醇或乙腈，然后加入适当的酸、碱、双氧水，达到起始的浓度。药品浓度可以使用10mg/mL，最后在进样前，以流动向稀释到一定浓度^[18]。从色谱条件等方面进行筛选、优化，最大程度检出相关的有关物质，并进行方法验证，同时对杂质进行液质分析^[19]，确定杂质结构。本文是采用高效液相色谱法^[20]对替莫唑胺原料有关物质进行研究。

第二章 有关物质

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