文 献 综 述

冬凌草甲素、乙素是唇形科(Labiatae)香茶菜属(Rabdosia)植物中的2种重要活性二萜成分。近来很多资料证明^[1]它含有的生物活性成分对映杉烷型二萜类化合物具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒和抗炎等药理活性。主要植物来源是香茶菜(Rabdosiaamethystoides)、显脉叶香茶菜(Rabdosia nervosa)、毛叶香茶菜(Rabdosia rabdosia)、道孚香茶菜(Rabdosiadownsis)和冬凌草(Rabdosia rubescens)、延命草(Isodon japonicus)等。上世纪70年代首次分得冬凌草甲素并发现其良好的药理作用，自此冬凌草甲素、乙素即在国内外引起了广泛关注。

1. 冬凌草甲素的药理作用

图：冬凌草甲素

1.1对于白血病的作用

研究发现,冬凌草甲素对多种肿瘤细胞均有显著的抑制或杀伤作用。抗白血病Ikezoe等^[2]研究发现，冬凌草甲素抑制多发性骨髓瘤、急性淋巴细胞白血病和成人型T细胞白血病细胞的生长。应用噻唑蓝(MTT )还原法检测细胞生长抑制率, 以流式细胞仪检测细胞凋亡及bc1- 2基因的表达水平, 并用端粒重复扩增( TRAP)法检测端粒酶活性, 发现5 umol/ L ~25 umol/ L的冬凌草甲素可诱导急性白血病HL-60细胞凋亡、抑制细胞增生[ 1] 以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的K 562细胞, 发现冬凌草甲素能抑制白血病K562细胞的生长并诱导细胞凋亡^[3] 。

1.2对于抗鼻咽癌、肺癌的作用

朱国臣等^[4]发现，冬凌草甲素能抑制人鼻咽癌CNE一2细胞生长，诱导其凋亡并坏死，流式细胞分析发现”亚二倍体峰”，冬凌草甲素作用后CNE-2细胞处在G，／M期的比例增多。Liu等^[5]通过研究了冬凌草甲素的放射增敏比。发现，冬凌草甲素(gt;28umol/L)能抑制肺癌SPC#8212;A．1细胞增殖并诱导凋亡。观察到凋亡细胞的形态明显变化，特别是用冬凌草甲素处理48～60 h的细胞48 h后，蛋白印迹法分析显示bcl．2表达下调而bax蛋白表达上调。

1.3对肝癌的作用

张俊峰等人^[6]以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培BEL-7402细胞, MTT法检测细胞生长抑制率, 应用流式细胞仪检测细胞凋亡，hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化。应用PCR-ELISA及RT-PCR法检测细胞凋亡前后端粒酶活性及端粒酶hTERT mRNA表达水平的变化。结果冬凌草甲素能抑制BEL-7402细胞的生长及诱导细胞发生凋亡; 降低端粒酶hTERT mRNA的表达水平及端粒酶活性可能是其重要作用机制之一。

1.4抗宫颈癌、乳腺癌、卵巢癌等作用

崔侨等^[7]等发现，冬凌草甲素明显抑制宫颈癌HeLa细胞增殖，诱导其凋亡并发生自噬。冬凌草甲素作用24 h后，促凋亡蛋白Bax、细胞色素c和控制Bax活力的去乙酰化酶SIRT一1的表达明显改变。冬凌草甲素(64umol／L)诱导的自噬通过影响SIRT．1和线粒体途径蛋白表达下调凋亡。Chen等1131研究了冬凌草甲素对人前列腺、乳腺癌(MCF一7)和卵巢癌(A2780和PTXl0)细胞生物活性的影响。冬凌草甲素对所有被测定的癌细胞都有抗增殖活性，IC。在5．8#177;2．3～11．72土4．8umol／L范围。更值得注意的是，冬凌草甲素诱导癌细胞凋亡的浓度不能诱导培养的正常人成纤维细胞凋亡。

1.5增强巨噬细胞对凋亡的U937细胞的吞噬作用

刘艳秋^[8]等人通过DNA 凝胶电泳检测UV 照射( 2 .4 J/ cm2, 4 min) 诱导U937 细胞发生凋亡, 琼脂糖凝胶电泳可见凋亡典型的DNA 梯带。2.7 umol L- 1的冬凌草甲素具有增强U937 分化的巨噬细胞对UV 照射诱导凋亡的U937细胞的吞噬作用, 并呈时间剂量依赖性,加入抗TNFa和抗IL- 1 的抗体, 培养12 h, 吞噬增强作用明显受抑制。冬凌草甲素在人外周血来源的巨噬细胞吞噬凋亡的U937 细胞过程中同样发挥增强吞噬的效果 Giemsa 染色, Hoechst33258 染色, 镜下检测计数吞噬作用研究发现冬凌草甲素可特异地增强巨噬细胞对凋亡的U937 细胞的吞噬作用, 其吞噬机制是通过诱导巨噬细胞TNFa和IL- 1 的释放。

2. 冬凌草乙素的药理作用

冬凌草素的抗白血病作用：PON 可以通过诱导白血病K562细胞调亡而发挥体外抗白血病作用。PON对K562细胞的诱导凋亡作用机制与caspse-3的活化以及降低PI3K /AKT信号通路中p-AKT及p-P85蛋白的表达水平有关, 而与MAPKs信号通路中的相关调节蛋白无关 ^[9]

冬凌草乙素浓度依赖性地抑制GBC2SD 细胞增殖及诱导其凋亡;药物作用24 h 后,细胞内Bcl22、p53、Fas/ APO21、C2myc 的表达有不同程度的下调;Caspase23 活性与凋亡程度相关。可以发现冬凌草乙素抑制GBC2SD 细胞的增殖和诱导其凋亡与Bcl22、p53、Fas/ APO21、C2myc 的表达有关^[10]。

冬凌草甲素与冬凌草乙素有相似的药理作用但也有不同Zhang等^[11]评价体外冬凌草甲素和冬凌草乙素对癌细胞和人外周血单个核细胞(PBMC)的抗增殖活性。冬凌草甲素比冬凌草乙素对4种癌细胞(人黑色素瘤A375一s2、人子宫癌HeLa、人乳腺癌MCF一7、鼠纤维肉瘤L929)有更强的细胞毒作用。

3.冬凌草甲素与冬凌草乙素的检测方法

目前有许多的方法对冬凌草甲素与冬凌草乙素的含量进行检测。可以通过采用薄层扫描法测定了冬凌草叶中冬凌草甲、乙素的含量。选用适合的展开系统, 能排除其他成分的干扰。其中杨中汉, 田京城^[12]用此法对冬凌草叶中冬凌草甲、乙素的含量进行了实际测定确定了生长在济源太行山区8 月份的冬凌草叶中冬凌草甲、乙素的含量相对最高。但是其中在样品溶液制备中生药提取后必须经脱色除杂，才能符合测定要求否则由于其他杂质的干扰会影响扫描测定，比较麻烦，并且具有操作繁琐的缺点。

也可以通过胶束电动色谱法同时测定冬凌草甲、乙素的含量。我们都知道冬凌草甲、乙素均为电中性物质,所以毛细管区带电泳无法将其分离,但考虑到二者亲脂性的不同,所以试验选择采用电动色谱的方式对二者进行分离。通过对分离条件的优化,不仅可以取得了良好的分离效果,而且分离时间也会因此大大缩短。通过定量分析方法的确证及对实际样品的测定,表明该方法准确可靠、方便快捷、试验费用低,为评价冬凌草片的含量提供了参考依据。张敬一¹,吴国刃等通过此方法同时测定冬凌草片中冬凌草甲、乙素的含量，值得我们借鉴。该方法具有准确可靠、方便快捷,能有效地控制药品质量的优点。

此次我打算采用LC-ESI-MS/MS的方法对大鼠血浆中冬凌草甲素和冬凌草乙素的浓度进行检测前报^[13～15]已报道了建立薄层扫描法测定冬凌草中冬凌草甲、乙素的含量及采用高效液相色谱法测定冬凌草甲素的含量。并且高效液相色谱法具有本法简便、准确、灵敏,重现性好,可用于冬凌草及其制剂的质量控制。通过对以前建立的HPLC 的测定条件进行改进,改变了流动相中溶剂的比例, 由此大大缩短了冬凌草甲、乙素的保留时间，提高效率。最后从精密度试验及加样回收试验来验证此法,准确性和灵敏性是否可用于冬凌草制剂(包括单味、复方) 批量产品的分析检定。并用相关的药代动力学程序拟合计算药代动力学参数。

4.冬凌草甲素、乙素的研究前景

冬凌草甲素、乙素具有对多种癌细胞具有很强的杀灭抑制作用，主要用于抗癌，抗菌、抗肿瘤、杀虫清热解毒、消炎止痛、健胃活血及等作用有着广阔的开发前景。目前，国内除了早期上市的冬凌草总提物制剂外，但是尚无冬凌草甲素、乙素的单体制剂。冬凌草甲素、乙素主要来自于唇形科植物冬凌草(冰凌草)和延命草。其中它的生产工艺：主要由醇提、萃取、层析、结晶等工序来完成。近年对冬凌草甲素的研究主要集中在生物活性上，在提取、分离、结构修饰、制剂及药动学等方面也作了很多有益的探讨，冬凌草乙素的研究近年也逐渐增多。近年的研究主要是冬凌草甲素，尤其是冬凌草甲素的抗肿瘤活性方面的实验报道较多。研究表明，冬凌草甲素，乙素具有较好的抗肿瘤活性，且对正常细胞毒性较低，具有很好的临床应用和开发价值。将冬凌草甲素开发成新药制剂，对开发利用丰富的自然资源具有重要的意义。

参考文献

[1]冯长伟, 潘祥林, 钟丽红, 等. 冬凌草甲素的提取分离. 山东中医药大学学报, 1999, 23( 5) : 461-462.

[2]Ikezoe T，Yang Y，Bandobashi K，et a1．Oridonin，aditerpenoid purified from Rabdosia rubescens，inhibits the proliferation of cells from lymphoid malignancies in asso#183;ciation with blockade of the NF一1c B signal pathways[J]．Mol Cancer丁讫P，。2005，4(4)：578-586．

[3] 申家英, 杨 波. 冬凌草甲素对H L- 60细胞的生长抑制作用及其对细胞端粒酶活性的调节[ J]. 白血病#淋巴瘤, 2003, 12( 4): 224- 226.

[4] 刘加军, 潘祥林, 伍新尧, 等. 冬凌草甲素诱导白血病K562细胞凋亡的机制[ J]. 肿瘤研究与临床, 2003, 15( 4) : 222- 225.

[5]朱国臣，肖大江，张亚男，等．冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞CNE一2的抑制作用【J】．时珍国医国药，2007，18(4)：804．8ID5．

[6]Liu J J，Huang R W，Lin DJ，et al，Anti-proliferative effects

of oridonin on SPC#8212;A-l cells and its mechanism of action

【J】．J Int Med Res，2004，32(6)：617#8212;625．

[7]张俊峰1, 陈规划1, 陆敏强1等冬凌草甲素对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用及其作用机制【J】．中成药，2006，28（9）

[8]崔侨，田代真一，小野寺敏，等．冬凌草甲素通过诱导人宫颈癌HeLa细胞自噬下调凋亡的机制【J】．药学学报，2007，42(1)：35#8212;39．

[9]刘艳秋等冬凌草甲素增强巨噬细胞对凋亡的U937

细胞的吞噬作用【J】．中国病理生理杂志，2006, 22( 2) : 209- 213

[10]刘晓丹冬凌草乙素对白血病K562细胞的诱导凋亡作用及机制研究【J】．中国中药杂志，2010，35（8）

[11] 薛宏伟　潘祥麟冬凌草乙素诱导GBC2SD 细胞的凋亡及Bcl22 、p53 、Fas/ APO21 、C2myc 表达的影响【J】．中国药理学通报，　2003 Nov ;19 (11) :1247～51

[12]杨中汉, 田京城冬凌草叶中冬凌草甲、乙素的含量测定【J】．河南工业大学学报( 自然科学版) 第26 卷第4 期2005 年8 月

张敬一 ,吴国刃胶束电动色谱法同时测定冬凌草片中冬凌草甲、乙素的含量【J】．中国医院药学杂志2010 年第30 卷第3 期

[13～15] [4 ] 袁珂, 胡润淮, 郑晓珂, 等. 薄层扫描法测定冬凌草中冬凌草甲素的含量[J ] . 中药材, 1997 , 20 (5) : 224.

[16] 袁珂, 胡润淮, 杨怡, 等. TLC 测定冬凌草中冬凌草甲、乙素的含量[J ] . 中国药学杂志, 1998 , 33 (10) : 611.

[17] 袁珂, 杨中汉, 杨怡, 等. 高效液相色谱法测定冬凌草中冬凌草甲素的含量[J ] . 河南科学, 1998 , 16 (2) : 175.