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摘 要

桃叶珊瑚苷是杜仲中提取的一种天然药物，具有多重药理活性，近年来备受关注。此环烯醚萜类化合物对睾丸组织具有较好的保护作用，但其作用机制尚不明确。本研究旨在讨论：雷公藤甲素在诱发小鼠睾丸损伤后，桃叶珊瑚苷在改善氧化应激损伤过程中的作用及机制。实验构建雷公藤甲素诱导的小鼠睾丸组织损伤模型，并给予桃叶珊瑚苷（5、10、20 mg/kg）小鼠治疗保护14天，观察睾丸组织形态，利用荧光示踪法测定小鼠体内血睾屏障完整性，Hamp;E染色法检测睾丸组织损伤，采取蛋白免疫印迹法检测睾丸组织中JNK和P-JNK蛋白表达，使用免疫组织化学法检测P-JNK蛋白表达。实验结果显示，与模型组相比，桃叶珊瑚苷组可有效逆转损伤小鼠睾丸损伤，具有显著的保护作用。研究进一步表明，桃叶珊瑚苷抑制JNK的激活，减轻睾丸氧化应激损伤，修复血睾屏障完整性，从而改善睾丸损伤。

关键词：雷公藤甲素 桃叶珊瑚苷 睾丸损伤 JNK(c-Jun氨基末端激酶) 氧化应激

The protective effect of Aucubin against Triptolide-induced Testicular injury in mice

ABSTRACT

The Aucubin extracted from Eucommia Ulmoides is a natural iridoid glycoside with multiple pharmacological activities, which has a good protective effect on testicular tissue. But its mechanism of action is not yet clear. The purpose of the study was to discuss the role and mechanism of Aucubin in ameliorating testicular damage induced by triptolide in mice. The experimental model of mouse testicular tissue damage induced by triptolide was constructed and treated with AU (5, 10, 20 mg / kg) for 14 days for treatment and protection. The integrity of the blood testis barrier in mice was examined by Hamp;E staining for testicular tissue damage. Western blotting were used to detect JNK and P-JNK protein expressions in tissues. Immunohistochemistry were adopted to examine P-JNK protein expression in testis. The experimental results show that the aucubin group can effectively reverse the testicular injury in injured mice and has a significant protective effect compared with the model group. The study further shows that Aucubin alleviates testicular injury by impeding JNK activation, attenuating testicular oxidative stress damage and maintaining the integrity of the blood testis barrier.

KEYWORDS: Aucubin; Triptolide; Testicular injury; C-Jun N-terminal kinase; Oxidative stress

目 录

摘要 I

ABSTRACT II

第一章 引言 1

第二章 文献综述 1

第三章 材料与方法 4

2.1 材料及设备 4

2.1.1 实验仪器 4

2.1.2 实验材料与试剂 5

2.1.3 实验动物 5

2.2 实验方法 6

2.2.1 实验动物给药剂量方案 6

2.2.2 体内血睾屏障完整性测定 6

2.2.3 Hamp;E染色检测睾丸组织损伤 7

2.2.4 组织蛋白提取实验 7

2.2.5 蛋白免疫印迹法（Western Blotting） 7

2.2.6 免疫组化实验 8

2.2.7 统计学处理 9

第四章 结果与讨论 9

3.1 结果 9

3.1.1 桃叶珊瑚苷对睾丸形态的影响 9

3.1.2 桃叶珊瑚苷对体内血睾屏障完整性的影响 9

3.1.3 桃叶珊瑚苷对睾丸组织结构的影响 10

3.1.4 桃叶珊瑚苷对睾丸组织内JNK和P-JNK蛋白表达的影响 11

3.2 讨论 13

第五章 结论与展望 14

参考文献 15

本科期间获得成果 18

致谢 19

引言

“生育危机”日渐成为一个普遍且严重的社会问题，流行病学研究显示，所有案例中，大约40%-50%案例的发生原因是男性不育^[1]。而其中大约70%的男性不育症的发病可归因于睾丸疾病。睾丸是男性的生殖器官，同时也是主要的生精器官。当产生了生精功能障碍这一类问题后，男性就会出现少精症、弱精症等现象。精子数量和质量的下降是导致男性不育问题的关键原因^[2]。

研究表明，随着社会环境质量的下降和人们生活环境的多元化发展，氧化应激化刺激在生活中越来越常见。氧化应激水平的上升致使睾丸组织受到损伤，尤其是让睾丸支持细胞受到严重损伤^[3]，且空气中的污染物或具有生殖毒性的药物可引起机体内活性氧（reactive oxygen species, ROS）积累，破坏机体内氧化与抗氧化能力之间平衡，从而导致男性生精功能障碍^[4]。

桃叶珊瑚苷传统中药杜仲等的主要活性成分，作为环烯醚萜类化合物，具有保肝，降压，抗肿瘤等众多药理特性，本课题将评估桃叶珊瑚苷在体内对睾丸细胞氧化应激损伤的保护作用，探讨其可能的分子机制。为其进一步的开发提供理论基础和依据。

第二章 文献综述

雷公藤甲素（Triptolide ，TP），又称雷公藤内酯醇，是一种多种生物活性的双萜三环氧化物，可从传统中药材雷公藤中提取，具有多种生物活性，例如抗炎、抗肿瘤、免疫调节、促凋亡等^[5]，临床上多应用其作为免疫抑制剂使用。

但因为雷公藤甲素在临床上的不良反应发生率远高于其他药物，会对机体造成严重的毒副作用，如肝毒性、肾毒性、心脏毒性、生殖毒性、骨质疏松等，所以其治疗潜力受到很大限制^[6]。在各种副作用中，雷公藤甲素的生殖毒性的发生率非常高，临床病例报告指出，雷公藤甲素对睾丸组织造成严重损伤，并导致精子数量及质量的下降^[7]。雷公藤甲素会对睾丸组织造成氧化应激损伤，且睾丸组织和睾丸间质细胞可能是雷公藤甲素的直接靶标^[8]。小鼠在服用雷公藤甲素后，抗生育效果显著，但小鼠警觉性低，所以不引起补偿性大量繁殖。故而也可应用于防治“四害”中的鼠类。目前雷公藤甲素已被用作诱导雄性动物不育模型的模型药物。

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