论文总字数：17809字

摘 要

本论文首先介绍了登革热病毒的结构，发病机理，当前应用的防治措施，可用于治疗登革热疾病的药物及分类，登革热药物的发展方向和应用前景，并探究了登革热药物的初级合成。本文主要研究抑制剂的合成路线，合成对登革病毒NS2B-NS3蛋白酶的有抑制作用的物质，（S）-1-（（S）-2-氨基-4-（甲硫基）丁酰基）-N-（4-硝基苯基）吡咯烷-2-甲酰胺及（S）-1-（（S）-2-氨基-4-（甲硫基）丁酰基）-N-（苯基）吡咯烷-2-甲酰胺，通过在药物分子上连接不同的基团，来探究当连上不同取代基时化合物活性的变化，从而找出最合适的取代集团。产物结构通过熔点、氢谱表征来确定。在进行实验中，我们需要学会纯化化合物的方法，掌握纯化步骤及结构表征。

关键词：登革热 前体 合成

ABSTRACT

This paper first introduced the structure and pathogenesis of dengue virus, the current prevention and control measures, the drugs and classification of dengue fever disease, the development direction and application prospect of dengue fever drugs, and explored the primary synthesis of dengue fever drugs. (S) -1 - ((S) -2-amino-4- (methylthio) butyryl) -N- (manufactured by Nippon Polyphosphate) 4-nitrophenyl) pyrrolidine-2-carboxamide and (S) -1 - ((S) -2-amino-4- (methylthio) butyryl) -N- (phenyl) 2-carboxamide, by connecting different groups on the drug molecule, to explore the changes in the activity of the compound when the different substituents are attached to find the most suitable substitution group. The product structure is determined by melting point, hydrogen spectroscopy. In the course of the experiment, we need to learn how to purify the compound, master the purification steps and structural characterization.

Key Words：dengue; precursor; synthesis

目 录

摘 要 I

ABSTRACT II

第一章 文献综述 1

1.1登革热简介 1

1.2登革病毒的结构 1

1.3登革热的发病机理 1

1.3.1病毒的细胞或组织嗜性 1

1.3.2病毒毒力学说 1

1.3.3抗体依赖增强（ADE）作用 2

1.3.4交叉反应性T细胞反应 2

1.4登革热的防治措施 2

1.4.1登革热的预防措施 2

1.4.2疫苗研发 2

1.4.3治疗措施 2

1.5登革热的治疗药物 3

1.5.1抗病毒的小分子药物 3

1.5.2单克隆抗体 3

1.5.3登革热病毒NS2B-NS3蛋白酶的抑制剂的研究 3

1.6本课题要解决的问题 4

1.7拟采用的研究手段 4

第二章 实验部分 6

2.1实验一 6

2.1.1实验路线 6

2.1.2实验材料 7

2.1.3实验步骤 8

2.2实验二 14

2.2.1实验路线 14

2.2.2 实验材料 14

2.2.3实验步骤 16

第三章 结语与展望 21

3.1结语 21

3.2展望 21

参考文献 22

附录 25

第一章 文献综述

1.1登革热简介

登革热是一种急性疾病，它是由登革热病毒引起的。登革热的典型症状有皮疹、发热、出血。登革热疫情较为严重的地区有东南亚和美洲地区等^[1]。据统计，2016年因登革热死亡的人数相比于往年呈下降趋势，但仍不可忽视，重灾区疫情仍然十分严峻。目前，很多国家都努力专研于登革热的治疗，登革病毒，预防登革热药物的开发。

1.2登革病毒的结构

登革病毒是其中一个血清型中的亚群，且属于黄病毒科黄病毒属^[2]。登革热病毒是衣壳体和包膜组合而成的，它的尺寸约为50nm。病毒有哑铃形、棒形和球形3种形态，其中哑铃形的大小为700nm×（20-40）nm，棒形尺寸为（175-200）nm×（42-46）nm，球形颗粒直径20-50nm，表面有5-10nm的突起。登革病毒的遗传物质和其他病毒的遗传物质一样都是在由蛋白质组成的外壳之中，但此病毒有一个特别的地方，它的蛋白质外壳为盔甲状，遗传物质外紧紧被包裹了90层^[3]。登革热病毒有一种蛋白酶对此病毒的蛋白质的合成是十分重要，这种蛋白酶叫NS3蛋白酶 ^[4]。

1.3 登革热的发病机理

1.3.1病毒的细胞或组织嗜性

40年前，人的外周血单核细胞就被证明是最容易感染登革热病毒的细胞，还有其他的发现表明炎症的发生可能是由病毒入侵诱导的，这也就是说单核细胞也许有着两种影响在登革热病毒侵入人体的过程中^[5]。从活检和尸检的报告中，可以发现病人的大多数器官和组织都有登革热病毒，皮肤和胃肠道浓度较高。许多患者都有不同程度的肝损伤^[6]。在病人生病期间，血管内皮细胞的效用一直有争议，但肯定的是血管内皮细胞肯定有其作用，因为毛细血管会变得更加通透是登革热的临床表现之一。

1.3.2病毒毒力学说

3型登革热是毒性最大的。登革热病毒的遗传物质容易突变， DENV感染的厉害水平与病毒的变异是脱不了干系的。

1.3.3抗体依赖增强（ADE）作用

经调查，再次感染病毒的患者发病率比第一次感染者高。

1.3.4交叉反应性T细胞反应

病毒会导致机体产生不同T细胞，具有交叉反应性，由于这种细胞亲和力低或是没有中和性，导致几乎不能除去侵入的病毒^[7-9]。

1.4 登革热的防治措施

1.4.1登革热的预防措施

消灭蚊子和防止蚊虫叮咬非常重要，我们需要让我们生活的环境更加干净，经常喷洒灭蚊的试剂。针对蚊子的问题，我国研究了一种 “绝育蚊”，这种伊蚊带有新型沃尔巴克氏体，为雄性。这种雄蚊与雌蚊在一起，无法产生下一代 ^[10]。

1.4.2疫苗研发

登革热病毒疫苗开发也是一个热点。至今，虽然有疫苗被研发出来，但效果都不好，且适用人群的范围不大。2015年全球首个登革热疫苗在3个国家获批，但疫苗的效果不算理想，它仅使人们患上登革热的几率减少60%，且9岁以下的孩子不在适用范围内。据报道，2017年年初，巴西政府加大投入，进行登革热疫苗的研究和试验^[11-14]。

1.4.3治疗措施

登革热到目前为止并没有效的针对病原的治疗方法^[15-17]，现在临床上主要采用对症和支持治疗：

1.4.3.1以物理降温为主

解热镇痛剂可诱发某些患者发生溶血反应且效果不理想，应谨慎使用。肾上腺皮质激素可以用于有很重中毒状况的患者，但只能在很小的时期内，剂量应严格控制，应为少量。

1.4.3.2补充水和电解质，维持机体正常的内环境

有大汗、腹泻症状的患者应及时通过饮用补充水分和电解质；对于呕吐、无法进食、脱水的患者，应静脉输液，输液时要时刻观察，以防加重病情。

1.4.3.3止血

止血药物适用于有出血或出血倾向者。情况不同用药也应该不同。维C等药物可以用于有出血倾向的患者。若出现有大出血的患者，应立即进行输血和维生素K1静脉滴注，维生素K1应该使用大剂量。

1.4.3.4降低颅内压

若有头痛十分强烈的、颅内压升高的登革热病人应立即使用甘露醇注射液静脉滴注，甘露醇注射液的浓度应为20%，可以同时用地塞米松进行静脉滴注。

1.5登革热的治疗药物

1.5.1抗病毒的小分子药物

抗病毒的小分子包括对病毒的侵入有抑制作用的小分子和将RNA、核酶作为靶点设计小分子药物。

1.5.2单克隆抗体

免疫球蛋白用于病毒导致的疾病的治疗时非常重要的治疗方法，单克隆抗体具有很强很高效的特异性，又没有什么副作用还可以与病毒发生中和反应使免疫系统产生反应，从而起到清除病毒的作用^[18,19]。

1.5.3登革热病毒NS2B-NS3蛋白酶的抑制剂的研究

登革病毒的NS3蛋白体现了高度的保守性。该蛋白具有很好的免疫原性。登革热病毒NS3蛋白酶对病毒的复制十分重要，因为它主要是在病毒复制过程中发挥作用。所以我们研究多肽和有抑制作用的小分子是专门抑制NS3蛋白酶的^[20,21]。

我们实验室在登革热病毒NS3—NS2B酶水平上筛选出了两个具有抑制登革热病毒NS3活性的化合物^[22,23]，为增强化合物水解酶的能力，我们对其进行了简单的结构修饰，经修饰的化合物仍具有较好的活性，其中活性最好的是Ki=4.8μM的化合物。

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