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摘 要

广藿香酮是广藿香的一个重要成分，具有各种已知的生物活性，尤其是良好的抗真菌效果。本课题组前期合成了一种新型的广藿香酮类似物——FLU-17[4-羟基-6-甲基-3-（4-甲基戊酸）-2H-吡喃-2-酮]，具有与广藿香酮类似的分子结构以及抗真菌效果。本实验建立了一种快速、简便、灵敏度高、选择性高的液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）方法，并应用于FLU-17的临床前大鼠血浆药代动力学研究。用甲醇提取生物样品，并采用反相Kromasil 100-5C18柱分离。流动相由水（含0.1%甲酸）-乙腈（45:55，V/V）组成，流速为0.25mL/min；正离子多级反应监测（MRM）模式下FLU-17和内标物愈创甘油醚的质量转换分别为240.0→222.0和199.0→125.2。校准曲线线性浓度范围是0.010–20.00μg/mL（R≧0.9996）。日内和日间的精密度和准确度均在±10%范围内。经验证，本方法可成功应用于经静注(140mg/kg)和口服(70、140、280mg/kg)给药后大鼠血浆的临床前药代动力学研究。

关键词：广藿香衍生物 FLU-17 LC-MS/MS 药代动力学 大鼠血浆

LC-MS/MS detection method in study of patchouli derivatives plasma concentration in rats

Abstract

Pogostone, a significant ingredient of patchouli, has a variety of known biological activities, especially oustanding antifungal effect. This study aims to eatablish a sensitive and reliable method of LC-MS/MS to detect a new Pogostone analog named FLU-17 [4-hydroxy-6-methyl-3-(4-methyl pentanoic acid)-2H- pyran-2-one], which has similar structure and several antifungal effects to Pogostone. A fast and simple LC-MS/MS method with high sensitivity and high selectivity for FLU-17 analysis in rat plasma was developed. Rat plasma samples were extracted with methanol, and separated on a reverse-phase column Kromasil 100-5C18. Moblie phase for elution was consisted of water (containing 0.1% formic acid) and acetonitrile (45: 55, V/V). Quality conversions of FLU-17 and guaifenesin under MRM mode were 240.0→222.0 and 199.0→125.2. Linear calibration curve concentration ranged from 0.010 to 20.00μg/mL (R ≧ 0.9996). Interday and intraday precision and accuracy were within ± 10% range. The LC-MS/MS we established was successfully applied to preclinical pharmacokinetic study of rat plasma by intravenous injection (140mg/kg) and oral administration (70, 140, 280mg/kg) of FLU-17.

Keywords: Patchouli derivatives;FLU-17; LC-MS/MS; pharmacokinetics; rat plasma

目 录

摘要 I

ABSTRACT II

第一章 文献综述 1

1.1 引言 1

1.2化学成分 1

1.2.1 FLU-17的化学成分 1

1.2.2广藿香的化学成分 1

1.3 研究方法 2

1.4 FLU-17的药理学特征 2

1.5 液相色谱-质谱联用的应用及进展 3

1.6药代动力学的意义 3

1.6.1药物代谢动力学研究在新药发现中应用 3

1.6.2药物代谢动力学在药理学研究中的应用 3

1.6.3药物代谢动力学在制剂学研究中的应用 4

1.6.4药物代谢动力学在中药现代化中的应用 4

1.6.5药物代谢动力学在毒理学研究中的应用 4

第二章 材料和方法 5

2.1材料与仪器 5

2.1.1实验仪器 5

2.1.2 药品与试剂 5

2.2 实验动物 6

2.3 溶液的制备 6

2.4 生物样品预处理 6

2.4.1 标准曲线样品和QC样品的处理 6

2.4.2 样品的预处理 7

2.5 色谱条件 7

2.6 质谱条件 7

2.7 方法学研究 7

2.7.1特异性 7

2.7.2 线性关系和灵敏度 7

2.7.3 精密度与准确度 7

2.7.4 提取回收率 8

2.7.5 基质效应 8

2.7.6 稳定性 8

2.7.7 稀释效应和残留效应 8

2.8 药代动力学 8

2.9 数据分析 9

第三章 结果与讨论 10

3.1 色谱和质谱条件的优化 10

3.2 方法学确证 11

3.2.1特异性 11

3.2.2线性关系和灵敏度 12

3.2.3精密度与准确度 12

3.2.4提取回收率和基质效应 12

3.2.5稳定性 13

3.2.6 稀释效应和残留效应 13

3.3 血浆药代动力学 14

3.4 结论 15

参考文献 16

致谢 20

第一章 文献综述

1.1 引言

真菌感染是一种常见疾病。在过去的几十年中，由于免疫功能低下患者的数量增加和广谱抗生素的大规模使用真菌感染的发病率一直在增加。免疫机能较低的患者会受到更为严重的局部以及全身性真菌感染。近年来，已广泛应用于目前治疗的中局部疗法已经能够治愈最浅表真菌感染，抗真菌感染从预防到治疗都取得了大幅度的进步，但真菌感染的类型在不断发生变化：真菌的变异速度快，耐药菌株不断出现[1]；此外，现有的抗真菌药物还受到毒性、副作用、药物相互作用、给药途径的限制，可用于局部及全身性真菌感染的治疗却为罕见[2]。常规药物如抗真菌唑类、多,烯、棘,白菌素、烯丙基胺，其治疗作用至今还未能够满足治疗的广泛需要。因此迫切需要寻找新的高效、低毒的抗真菌药物，同时也有利于社会经济及医疗领域。

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