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摘 要

科学研究表明，生物体很多疾病的发生和衰老都与体内自由基链式反应和脂质过氧化有关，抗氧化剂是阻止氧气不良影响的物质。在生物体细胞内产生的活性氧化物包括过氧化氢（H₂O₂）、次氯酸（HClO）、自由基例如羟基自由基（·OH）和超氧阴离子（O₂^–·）等。因此研制安全有效的抗氧化性的物质至关重要。

LHL8作为一种天然黄酮类物质，理论上具有一定的抗氧化活性，对自由基具有清除作用，因此对LHL8抗氧化活性进行研究具有一定的使用与科研价值。

本课题采用体外法，从自由基的清除能力、抑制脂质氧化能力、样品还原能力三个方面来综合考察样品的抗氧化性能。LHL8对DPPH自由基的清除试验中，样品溶液浓度在15μg/mL时，LHL8对DPPH的清除率可达39%，高于同浓度下的BHT和Vc，随着浓度增加，清除率逐渐达到饱和，此时LHL8对体系中DPPH的清除能力与BHT和Vc相当；对羟基自由基的清除试验中，当LHL8浓度达到100.32μg/mL时，对其清除率可达44.60%，同浓度下，LHL8对羟自由基的清除能力低于Vc，但高于BHT；还原能力试验中，当样品浓度达到104.2μg/mL时，可使吸光度增加0.862，其还原能力同样低于Vc，高于BHT；在抑制脂质过氧化试验中，随时间的增加，LHL8对亚油酸的过氧化抑制率一直处于缓慢上升的状态，而Vc和BHT则在后期对脂质过氧化的抑制能力逐渐降低。由此可得LHL8对自由基有一定的清除作用，且存在一定的还原能力以及抑制脂质过氧化作用。

关键词： 抗氧化活性 自由基 DPPH自由基的清除 硫代巴比妥酸比色法 铁离子还原法

The study of the antioxidant activity of LHL8

ABSTRACT

Studies have shown that the occurrence of the organism and many diseases of aging are associated with free radical chain reaction of lipid peroxidation and antioxidant is to prevent the adverse effects of oxygen species.Reactive oxygen species in living cells include hydrogen peroxide (H₂O₂), hypochlorous acid (HClO), e.g., hydroxyl radicals radical (·OH) and superoxide anion (O₂). Therefore essential to develop a safe and effective antioxidant substances.

LHL8 as a natural flavonoids, in theory, it has a certain antioxidant activity on free radical scavenging effect, so LHL8 antioxidant activity has some research with scientific value.

This topic vitro method, from the radical scavenging activity, inhibition of lipid oxidation, samples were reduced ability to integrate the three aspects investigated the antioxidant properties of the samples. LHL8 on DPPH radical scavenging test, the concentration of the sample solution at 15μg / mL, LHL8 on DPPH clearance rate of 39%, higher than BHT and Vc same concentrations, as the concentration increases, the clearance rate gradually reaches saturation in this case LHL8 of DPPH scavenging system with BHT and Vc considerable; for hydroxyl radical scavenging test when LHL8 concentration 100.32μg / mL, its clearance rate of 44.60 percent, under the same concentration, LHL8 hydroxyl radical scavenging capacity is less than Vc, but higher than BHT; reducing power test, when the sample concentration 104.2μg / mL, can increase in absorbance 0.862, which is lower than the same reducing power Vc, higher than BHT; in inhibition of lipid peroxidation test, with the increase of time, LHL8 of linoleic acid peroxidation inhibition rate has been slowly rising in the state, and Vc and BHT in the ability to inhibit lipid peroxidation late to oxidation decreased. LHL8 thus available for scavenging free radicals have a certain, and there is a certain reduction activity and inhibition of lipid peroxidation.

Keywords: Resistance to oxidation; Free radical; DPPH radical scavenging; Thiobarbituric acid; Iron reduction

目 录

摘 要 I

ABSTRACT II

第一章 文献综述 1

1.1 前言

1.2 氧化、抗氧化及抗氧化剂

1.2.1 氧化与自由基

1.2.2 抗氧化

1.2.3 抗氧化剂的概况

1.2.4 天然抗氧化剂的研究发展

1.3 常用的抗氧化活性体外测定方法

1.3.1 对自由基的清除能力

1.3.2 抗脂质过氧化活性

1.3.3 还原能力

1.4 LHL8抗氧化活性研究

第二章 材料与方法 7

2.1 仪器与试剂

2.1.1 主要试剂

2.1.2 主要仪器

2.2 试验方法与方案

2.2.1 DPPH·自由基清除能力的测定方法

2.2.2 ·OH羟自由基的清除能力的测定方法

2.2.3 还原性的测定方法

2.2.4 抗脂质过氧化能力的测定

第三章 结果与分析讨论 11

3.1 样品对DPPH自由基（DPPH·）的清除作用

3.2 样品对羟自由基（·OH）的清除作用

3.3 样品还原能力

3.4 样品抗脂质过氧化能力

第四章 结论与展望 20

4.1 结论

4.2 展望

参考文献 22

致 谢 25

第一章 文献综述

1.1 前言

如今，越来越多的研究表明，有机体的大多疾病和衰老现象都与脂质过氧化有关。自由基对肿瘤有催化和推动作用，因此各种抗氧化物在一定程度上都具有抑制肿瘤的功能^[1]。而抗氧化剂具有强的抗氧化活性和清除自由基的能力，进而预防机体细胞抵抗自由基的攻击，因此在食品技术和医药学领域引起广泛关注。近些年来，随着仪器和技术的发展，抗氧化活性的测定方法不断完善，抗氧化活性的考察范围也更加全面，如氧耗的测定、电子自旋共振（ESR）法、电子顺旋共振（EPR）法、光谱法和降解产物的测定等^[2-3]。检测技术的对象各有不同，各有优缺点。由于氧化过程的复杂性，要用单一评估方法准确地得出某化合物的抗氧化能力是不精确不现实的。因此，研究某些物质的抗氧化活性时，需要依据实验操作条件不同，采用多种方法检测分析，从不同的角度对其抗氧化活性进行研究。

1.2 氧化、抗氧化及抗氧化剂

1.2.1 氧化与自由基

氧元素与其他物质元素之间发生化学反应，可分为生物氧化与化学氧化。人体中的新陈代谢可以看作是许多氧化还原反应的组合。一方面氧参与生物体的生命活动，另一方面氧在代谢过程中，由于电子转移形成活性氧，生成氧自由基。正常情况下，机体内的自由基是在产生与清除之间处于动态平衡的，能够保持机体生命活动的正常进行。但如果机体产生自由基速度过快或者清除速率过慢，就会导致体内产生过多的活性氧和活性氮等自由基，一旦超出临界值时，机体内会不断产生自由基并引发一系列生物学反应，这些反应会对机体内生物大分子物质和细胞器造成损害，加速机体的衰老和各种疾病的发生^[4]。

当自由基的浓度达到一定浓度是会对机体造成损伤。其反应活性强，具有氧化能力，一旦在组织内形成，便会向周围扩散，引发细胞膜及细胞组织损伤，损伤有机体。主要产生于机体氧化过程中的活性氧自由基是我们体内主要的自由基，这些自由基中，羟基自由基的活性是最强的。

1.2.2 抗氧化

根据食品药品监督管理局（FDA）中的定义，抗氧化剂是指作为延迟因氧化引起的裂变、酸败或变色，能够有效抑制自由基氧化反应的物质。抗氧化剂可直接作用于自由基，也可作用在易产生自由基的物质，防止自由基的进一步产生。在生物体内存在许多清除活性氧的体系来维持机体内活性氧的产生和清除，比如维生素E，当体内的氧自由基平衡体系出现失衡时，通过使用一些抗氧化剂来缓解体系的失衡，维持氧自由基体系的平衡^[5]，从而预防疾病的发生。抗氧化剂还可以保持食品的稳定性，延长储存期。抗氧化剂的作用机理是多方面的，例如抗氧化剂能通过键的均裂，释放出体积小、亲和强的氢自由基，进而与链式反应生成的自由基结合生成稳定的分子态化合物，阻断链式反应的传递，达到保护细胞、组织免遭氧化损伤的作用^[6]。

1.2.3 抗氧化剂的概况

随着人们生活条件的提高，人们对抗氧化剂的需求也日益增长，许多抗氧化剂逐渐被开发、提取以及被合成，目前一些天然抗氧化剂也开始大量产业化，如维生素E、维生素C、茶多酚等，尤其最近几十年，由于合成抗氧化剂的安全性问题受到质疑，人们开始关注天然植物中的抗氧化活性物质，这一类物质主要有酚酸类、黄酮类、多糖类化合物等。天然抗氧化剂即可以用来作食品添加剂，还可以作为药品、化妆品添加剂以及保健品等，具有很高很广的经济利用价值。

1.2.4 天然抗氧化剂的研究发展

通过对天然抗氧化剂的了解，我们发现，随着人们对于食物的品质和安全性的要求，以及人们对身体健康的重视。没有毒副作用的天然抗氧化剂越来越受到青睐。不仅仅由其安全性，同时也是由于天然抗氧化剂的开发利用途径多种多样，不仅可以作为食品，还可作为药品、化妆品添加剂，也可以开发为保健用品。部分中草药除了具有其独特药效外，其植物体内所含有的一些功能性成分，还能够起到很好的抗氧化的作用，因此含抗氧化活性成分的植物，近年来也引起了医药公司的重视。天然的抗氧化剂的来源主要有三个方面，香辛料、中草药如冤丝子、苦参、万寿菊、刺五加、枸杞、管花肉灰蓉、苟药等^[7-13]和一些其他天然植物。

1.3 常用的抗氧化活性体外测定方法

1.3.1 对自由基的清除能力

1.3.1.1 ORAC法^[14-15]

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