论文总字数：33724字

摘 要

化疗是目前白血病主要的治疗手段，而化疗过程中肿瘤细胞对化疗药物产生多药耐药（MDR）常使化疗达不到预期效果。多药耐药是肿瘤细胞耐药的常见形式，也是白血病化疗失败和复发的主要原因。因此，如何逆转多药耐药是肿瘤治疗亟待解决的重要问题。

本课题选用可生物降解材料聚乳酸羟基乙酸（PLGA）、聚赖氨酸（PLL）、聚乙二醇（PEG）作为合成新型纳米载药系统的原料，通过优化反应条件，制得PLGA-PLL-PEG聚合物。采用该聚合物包载抗白血病经典药物柔红霉素（DNR）及第三代MDR逆转剂汉防己甲素（Tet），并偶联转铁蛋白（Tf），构建一种具有主动靶向性能的Tf-PEG-PLL-PLGA纳米粒，以期逆转白血病多药耐药。

本研究证明，设计的PLGA-PLL-PEG载体可同时包载DNR和Tet，纳米粒可降低化疗药物毒副反应，逆转白细胞耐药性。本研究将为该纳米粒的后期动物及临床研究实验提供参考，同时为PLGA-PLL-PEG载体应用于其它肿瘤药物奠定基础。

关键词：PLGA-PLL-PEG 柔红霉 纳米粒 多药耐药

The preparation of the drug-loaded PLGA - PLL - PEG package soft erythromycin nanoparticles

Abstract

Chemotherapy is the main method for the treatment of leukemia, but the tumor multidrug resistance (MDR) often makes chemotherapy can’t achieve the expected results. Multidrug resistance is a common form in tumor cells, and it’s the main reason for the failure and relapse of leukemic chemotherapy. Therefore, how to overcome the MDR is an urgent and important problem.

In our research, we use the biodegradable materials including poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA), poly-L-lysine (PLL), polyethylene glycol (PEG) to synthesis novel nanodrug carrier system. We optimize the reaction conditions to synthesis PLGA-PLL-PEG, then use it to delivery the classical antileukemic drug daunorubicin (DNR) and the MDR reversal agents of tetrandrine (Tet) and couple transferrin (Tf).We except the Tf-PEG-PLL-PLGA nanoparticles can overcome the problem of multidrug resistance of leukemia.

Our research demonstrated that PLGA-PLL-PEG polymer can entrap DNR and Tet , nanoparticles can reduce the toxicity of chemotherapy drugs and overcome the resistance of leukocytes. This study will provide a reference for vivo tests and clinical studies. At the same time, our research may become the foundation for PLGA-PLL-PEG applied to other anticancer drugs.

Keywords: PLGA-PLL-PEG；Daunorubicin；Nanoparticles；Multidrug resistance

目 录

摘要 I

Abstract II

第一章 前言 1

1.1 背景资料 2

1.1.1肿瘤靶向治疗 2

1.2 载药纳米粒在肿瘤治疗中的优势 3

1.2.1 纳米粒逆转多药耐药的原理 3

1.2.2 纳米粒的分类 4

1.3 盐酸柔红霉素及汉防己甲素 5

1.3.1盐酸柔红霉素 5

1.3.2 汉防己甲素 6

1.4 载药纳米粒的研究状况 7

1.4.1 共聚物载体研究 7

1.4.2转铁蛋白受体为靶点的肿瘤治疗 8

1.4.3 共聚物纳米粒制备方法研究进展 9

1.5 本课题研究方向及目标 10

1.5.1主药研究方向 10

1.5.1拟解决的关键科学问题 11

第二章 合成PLGA-PLL-PEG-CDI 12

2.1 合成过程 12

2.1.1 装置 12

2.1.2 合成的图解 13

2.1.3 PLGA-PLL-PEG的合成 13

2.1.4 合成PLGA-PLL-PEG-CDI 13

2.2 结果与讨论 14

2.2.1 合成PLL-CBZ 14

2.2.2 PLGA-PLL-CBZ的合成 15

2.2.3 PLGA-PLL的合成 15

2.3.4 PLGA-PLL-PEG-CDI的合成 16

2.3本章小结 17

第三章 制备PLGA-PLL-PEG包裹柔红霉素 19

3.1引言 19

3.2 实验部分 19

3.2.1装置 19

3.2.2制备纳米粒 20

3.2.3 包封率及载药量的测定 20

3.2.4 纳米粒粒径的测定 21

3.2.5 考察纳米粒的形态 21

3.3 结果与讨论 21

3.3.1 溶剂扩散法制备纳米粒的单因素考察结果 21

3.3.2 复乳化溶剂挥发法制备纳米粒的单因素考察结果 21

3.3.3蛋白含量的测定 26

3.3.4 纳米粒载药量的包封率 28

3.3.5 纳米粒的外观 29

3.3.6 纳米粒溶液粒径 29

3.3.7 纳米粒微观形态 30

3.4 本章小结 30

3.4.1 最佳制备工艺 30

3.4.2 蛋白含量及蛋白结合效率测定方法 30

第四章 PLGA-PLL-PEG-TF纳米粒的制备及质量研究 32

4.1 引言 32

4.2实验部分 32

4.2.1 实验材料和仪器 32

4.2.2 释放介质的选择 32

4.2.3 检测波长的选择 33

4.2.4 柔红霉素HPLC分析方法的建立 33

4.2.5 药物在释放介质中的稳定性 34

4.2.6 透析药物体外释放影响 34

4.2.7 纳米粒体外释放特性研究 34

4.3结果与讨论 34

4.3.1 检测波长的确定 34

4.3.2 柔红霉素HPLC分析方法的建立 35

4.3.3 柔红霉素及汉防己甲素的溶液稳定性 38

4.3.4 透析袋对药物释放研究药物的影响 39

4.3.5 纳米粒体外释药特性的研究 40

4.4本章小结 41

参考文献 42

致谢 45

第一章 前言

世界卫生组织最新数据显示，到2020年前，全球癌症发病率将增加50%，即每年将新增1500万癌症患者。其中，20%的新发癌症病人在中国，24%的癌症死亡病人在中国，癌症已成为我国人口死亡的主要原因之一^[1]。

目前肿瘤治疗的主要手段之一仍然是化疗^[2]，化疗药物本身对肿瘤细胞的杀伤作用很强，但目前临床广泛使用的抗肿瘤药物多为非选择性药物，体内分布广泛，常规治疗剂量即可对正常组织器官产生显著的毒副作用，导致患者不能耐受，

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