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摘 要

本试验主要研究通过大鼠给药能否经胎盘传递给小鼠或者经过乳汁传递给小鼠,利用高效液相色谱质谱联用分析法进行含量测定方法的研究和方法学考察。方法：色谱柱为Xterra MS-C18柱（2.1*100mmLD,5um,美国Waters公司），流动相为 0.1%甲酸水溶液-甲醇液=A-B等度洗脱A:B=70：30，流速为0.2ml/min，进样量为5μl。检测方式为多反应监控 (MRM)，离子极性为正离子(Positive)，离子化方式为电喷雾离子化(ESI)，检测对象为甲磺酸胺银杏内酯B，[M H] ¹m/z 496.3@18eV→m/z72.2；拉呋替丁，[M H] ¹ m/z 432.3@42eV→m/z351.3，毛细管电压为4.0 V，锥孔电压为40V，源温为120℃，脱溶剂区温度为350℃，碰撞气（氩气）压力为3.13 ×10^-3 mbar，脱溶剂气流速：400 L/h气帘气流速为50 L/h。通过实验测得标准曲线线性范围为5ng/ml～2000ng/ml，线性关系良好；高、中、低三种浓度的批间和批内提取回收率均大于85%,最低定量限为5ng/mL，符合生物样品分析要求。结论：大鼠可以通过胎盘将XQ-1H传递给小鼠。

关键词：XQ-1H丶乙酸乙酯丶氯化钠注射液丶LC-MS/MS分析方法

Perinatal vial XQ - 1 h rats with poison dynamics research

Abstract

The main test in rats by administration to mice can pass through the placenta or through breast milk delivered to mice, research and methodological study method for the determination of the use of high performance liquid chromatography mass spectrometry analysis. Methods: The column was Xterra MS-C18 column (2.1 * 100mmLD, 5um, Waters, USA), the mobile phase was 0.1% formic acid - methanol solution = AB isocratic A: B = 70:30, flow rate: 0.2ml / min; injection volume was 5μl. Detection method for the multiple reaction monitoring (MRM), ion polarity is positive ions (Positive), ionization mode as electrospray ionization (ESI), to detect objects as methane sulfonic acid amine ginkgolide B, [M H] 1m / z 496.3 @ 18eV → m/z72.2; lafutidine, [M H] 1 m / z 432.3 @ 42eV → m/z351.3, capillary voltage of 4.0 V, cone voltage of 40V, source temperature was 120 ℃, desolvation zone temperature 350 ℃, collision gas (argon) pressure of 3.13 × 10-3 mbar, desolvation gas flow rate: 400 L / h flow rate of the air curtain 50 L / h. Experimentally measured by the standard curve was linear in the range of 5ng/ml ~ 2000ng/ml, good linearity; high inter-assay medium, and low concentrations and intra-assay extraction recoveries were more than 85%, the lowest limit of quantification was 5ng/mL meet the requirements of biological sample analysis. Conclusion: The rat can pass through the placenta to XQ-1H passed to mice.

Keywords: XQ - 1H, Ethyl Acetate,Sodium Chloride injection, LC - MS/MS analysis method.

目录

摘要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1甲磺酸胺银杏内酯B的基本信息 1

1.2实验过程与方法简述 3

1.2.1实验过程 3

1.2.2统计学处理 4

1.2.3  结 果 4

1.2.4 甲磺酸胺银杏内酯B对胚胎形成的影响  4

1.2.5 甲磺酸胺银杏内酯B对胎鼠生长发育的影响  5

1.2.6 甲磺酸胺银杏内酯B对胎鼠内脏和骨骼畸形的影响  5

1.3 研究方法与目的 5

第二章 HPLC-MS/MS法检测大鼠围产期组织中XQ-1H方法学研究 8

2.1 仪器与试药 8

2.1.1 仪器 8

2.1.2 试药 8

2.2 测定方法 8

2.2.1溶液的配制 8

2.2.2 色谱条件 9

2.2.3 质谱条件 9

2.3 方法学研究 9

2.3.1样品来源 9

2.3.2组织样本提取 10

2.3.3XQ-1H和拉呋替丁电喷雾离子化子离子质谱扫描图 10

2.3.4 提取回收率试验 12

2.4小结 13

第三章 组织样本检测结果 14

3.1组织样本标准曲线的配制方法及结果 14

3.2组织样本检测结果 14

第四章 结果和展望 23

4.1 结果 23

4.2展望 23

参考文献 25

致谢 27

第一章文献综述

1.1甲磺酸胺银杏内酯B的基本信息

甲磺酸胺银杏内酯B的主要成分是甲磺酸胺银杏内酯B（XQ-1H）。甲磺酸胺银杏内酯B是由银杏内酯B结构修饰而成的抗血小板活化因子的化学药物^［1，5］。其由于水溶性好，故做成冻干粉针，用于缺血性脑血管病急性发作期，已作为一类新药注册申报。为了保证供试品的安全使用，了解有无潜在的致畸作用，我们对其进行了大鼠的胚胎胎仔发育毒性实验研究，同时采用常规遗传毒性试验方法，观察其是否具有潜在的遗传毒性。银杏内酯B是中药银杏叶提取物的主要活性成分之一，可以抑制血小板聚集、抗炎、抗休克、保护心脑血管及治疗急性胰腺炎等，是治疗急慢性脑缺血疾病的有效药物^［4］。有报道显示，5 mg·kg-1银杏内酯B 能降低大鼠血浆促炎因子含量, 提高IL12和细胞因子拮抗剂含量^［7］，8、4 mg·kg-1银杏内酯B可明显减少三氯化铁致大脑中动脉血栓形成局灶性脑缺血大鼠脑梗塞程度^［3］；银杏内酯B 10μmol·L-1对缺血再灌注心肌损害具有明显的保护作用，其机制可能是拮抗PAF和抑制自由基的产生^［8］。因此，银杏内酯B有良好的临床应用前景。银杏内酯B化合物为白色结晶，水溶性极小，临床作为注射剂使用受到一定的限制。通过合成银杏内酯B衍生物(XQ)，解决了其水溶性低的问题，具有更高的生物利用度。实验表明，XQ对PAF、ADP、AA、COL诱导的血小板聚集有抑制作用，其中对PAF诱导剂的作用强于银杏内酯B，其作用机制可能与拮抗PAF受体有关^［9］。

甲磺酸胺银杏内酯B的结构及其药理作用

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