论文总字数：19942字

摘 要

斑马鱼是近年来新兴发展起来的一种用于研究脊椎动物发育遗传学的模式生物，因为其快速、经济、预测性好、可比度高的特点，目前斑马鱼模式动物已经被越来越多的药物研发机构应用于药物毒性和安全性评价中。

猪牙皂主要含有多种类型的三萜皂苷，具有抗炎、抗过敏、抗肿瘤、抗病毒、祛痰、改善心肌缺血等药理作用。急性毒性是指机体（人或实验动物）一次（或24小时内多次）接触外来化合物后所引起的中毒效应。急性毒性试验对了解药物的安全性是非常必要的。通过观察和统计受试生物在短时期（一般为24h到2周以内）中的死亡率，计算该药物对受试生物的半数致死剂量（LC₅₀），从而评价该药物毒性的强弱。本论文通过进行斑马鱼急性毒性实验来评价猪牙皂中七种三萜皂苷类化合物的急性毒性以及构效关系。实验中收集斑马鱼的受精卵，于培养箱中培养72h后，分别加入不同浓度的七种皂苷化合物，继续培养24h后观察斑马鱼的成活率，并且作出曲线图得出LC₅₀，从而以此来评价七个化合物的急性毒性的强弱。研究表明，FGA-1、 FGA-3、 FGA-9、 FGA-10为中毒， FGA-5、 FGA-16为低毒， FGA-11为高毒。

关键词：猪牙皂皂苷 斑马鱼模型 急性毒性

Abstract

Zebrafish is a newly developed in recent years for a model organism to study vertebrate development genetics. Because of its rapid, economic and good predictability and comparable degree is high, the zebrafish as animal model has been applied by a growing number of drug research and development institutions to drug toxicity and safety evaluation.

Gleditsiae Fructus Abnormalis  mainly contains a variety of types of major triterpenoid saponins, and it has anti-inflammatory, anti-allergic, anti-tumor, anti-viral, expectorant, improve myocardial ischemia and other pharmacological effects. Acute toxicity refers to the toxic effects caused by the body (human or animal) once (or multiple times within 24 hours) contact with foreign compounds. Acute toxicity test is necessary to understand the safety of drugs. Through observating and statisticing the organisms being tested in short period (usually within 24h to two weeks), calculating half lethal dose (LC₅₀) of the drug on the organisms being tested, evaluate the strength of the drug toxicity. This article evaluate seven triterpenoid saponins in Gleditsiae Fructus Abnormalis compounds of acute toxicity and structure-activity relationship by doing the acute toxicity experiment on zebrafish. The zebrafish eggs being collected in the experiments, are cultivated for 72 h after adding different concentrations of seven compounds respectively, then continue to be cultivated for 24 h ,and finally observe the survival rate of zebrafish, and draw the graph of LC₅₀, in order to evaluate the strength of the acute toxicity of the seven compounds. The research result shows that FGA-1、FGA -3,、FGA-9 and FGA-10 are medium toxicity, FGA-5and FGA-16 are the low toxicity, FGA - 11 is high toxic.

Keywords：Gleditsiae Fructus Abnormalis saponins Zebrafish model

Acute toxicity

目 录

摘 要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1斑马鱼模型简介及其在生命科学研究中的应用 1

1.1.1斑马鱼模型产生 1

1.1.2斑马鱼的外观 1

1.1.3斑马鱼的特性 1

1.1.4斑马鱼的日常管理 2

1.1.5斑马鱼的繁殖 3

1.1.6斑马鱼模型在生命科学研究中的应用 4

1.2猪牙皂的化学成分及药理作用 7

1.2.1 猪牙皂介绍 7

1.2.2 猪牙皂的化学成分 7

1.2.3 猪牙皂的药理作用 8

第二章 利用斑马鱼模型评价猪牙皂皂苷的急性毒性 10

2.1 引言 10

2.2实验材料和方法 10

2.2.1待测化合物简介 10

2.2.2斑马鱼的饲养 12

2.2.4主要仪器 13

2.2.5评价7个化合物的急性毒性 13

2.3结果与讨论 14

2.3.1 结果 14

2.3.2讨论 16

2.3.3结论 17

第三章 总结与展望 18

3.1 总结 18

3.2 展望 18

参考文献 19

致 谢 22

第一章 文献综述

1.1斑马鱼模型简介及其在生命科学研究中的应用

1.1.1斑马鱼模型产生

斑马鱼又叫作蓝条鱼、花条鱼、斑马担尼鱼等^[1]，是一种发现于印度和巴基斯坦水域的热带鱼，因为身体侧部有银蓝色的纵向条纹而得名。由于斑马鱼具有个体小、易于饲养，体外受精、产卵量高、繁殖周期短等生物学特点，所以其逐渐被用于发育生物学和遗传学等研究领域。1981年George Streisinger等^[2]在《Nature》杂志上发表了有关斑马鱼人工雌核发育的研究成果，从此拉开了斑马鱼发育生物学和遗传学的研究序幕。1994年5月，来自于世界各地的从事斑马鱼发育和遗传学研究的学者集会冷泉港，以“斑马鱼发育和遗传”为题展开了热烈的讨论。会议结束后，国际两大科学杂志《Nature》和《Science》为此都发表了专题评述^{[3，4 ]}，认为斑马鱼已经完全具备成为脊椎动物分子发育生物学甚至是人类基因组计划模式物种的条件，可以被确定为一种新型的模式生物。

1.1.2斑马鱼的外观

斑马鱼隶属于硬骨鱼类、辐鰭纲、鲤形目、鲤科、鲐属，是一种小型的淡水鱼。斑马鱼成鱼的体长约为4-6cm左右，体型呈纺缍形，背部为橄榄色。斑马鱼体侧从鳃盖后侧至尾部有数条银蓝色纵向条纹，尾鳍长而呈叉形。斑马鱼雌雄容易区分，雄性鱼体修长，鳍大，体色偏黄间以柠檬色条纹，雌性鱼体较肥大，体色较淡，怀卵期鱼腹膨大明显^[5]。

1.1.3斑马鱼的特性

斑马鱼是一种脊椎动物，具有个体小、繁殖周期短、产卵量高和对水质要求不高、易于饲养等特点，被国际化组织(ISO)认定为标准鱼类毒性生物。长久以来，斑马鱼作为模式生物应用于毒理学、胚胎学、发育生物学和分子生物学的研究中^[6]。斑马鱼及其胚胎作为实验生物模型具有如下的独特优势：

①斑马鱼实验属于整体动物研究实验，它能反映化合物吸收、分布、代谢和排泄的过程。并且，斑马鱼同人类基因组的相似度达到了87%，有和人类近似的毒性特征以及信号传导通路。斑马鱼的各种组织和器官在生理学、解剖学和分子水平上已经被证实与哺乳动物类似，因此斑马鱼是一种可比性较强的模式生物。

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