摘 要

目的：本项目试验研究将要采用反相高效液相色谱法(Reversed-phase high performance liquid chromatography)测定维生素 (Vitamin )有关物质。

方法：仪器：岛津LC-2030PLUS; 色谱柱：YMC；131GA80035(150mm*4.6mm,3um) 流动相：乙腈 紫外检测波长为265nm ，流速为 1.7ml每分钟 ，进样量为5ul。

进行了专属性（specificity）、稳定性（The stability of）、精密度（precision）、重复性（repetitive）、耐用性（durability）等项目的方法研究。

结果：稳定性（The stability of）良好，精密度（precision）、重复性（repetitive）、专属性（specificity）、耐用性（durability）均符合要求。

结论：该检测方法操作简便、结果准确、可靠。

关键词：维生素（Vitamin ） 反相高效液相色谱 有关物质

RP-HPLC method for the determination of vitaminrelated substanceson

Abstract

Objective: This study selected reversed-phase high performance liquid chromatography for the determination of vitamin.

Method: Instrument: daojin LC-2030plus; Column: (4.6*150mm, 3um); Mobile phase: acetonitrile ；The uv detection wavelength was 265nm； flow rate was 1.7ml/min.

The injection volume was 5ul. The methodological studies of specificity, standard curve, stability, precision, repeatability, recovery rate, etc. were carried out.

Results: The precision, repeatability, and recovery rate all met the test requirements. Conclusion: The detection method is simple, accurate and reliable.

Key words: Vitamin Reversed-phase high performance liquid chromatography

目录

RP-HPLC法测定维生素（Vitamin ）有关物质 I

摘 要 I

第一章 维生素的综述 1

1.1 维生素Ergocalciferol 1

1.1.1维生素D（VitaminD）的发现 1

1.1.2维生素（Vitamin ）的合成路线^[8] 2

1.1.3维生素（Vitamin ）的工艺流程图 3

1.1.4维生素（Vitamin ）的药理作用 4

1.1.5维生素（Vitamin ）的临床应用 4

1.1.6维生素（Vitamin ）的测定 5

1.2研究依据与目的 6

第二章 维生素（Vitamin ）有关物质的测定 6

2.1仪器与试剂 6

2.1.1 仪器设备 6

2.2.2溶液的配制 8

2.2.3色谱条件 8

2.2.4实验结果分析 9

2.3方法学研究 10

2.3.1维生素有关物质方法专属性试验机检测限测定 10

2.3.2维生素有关物质破坏性方案及溶液稳定性试验 11

2.3.3重复性实验 15

2.4讨论 17

2.5小结 18

第三章 结论与展望 19

3.1 结论 19

3.2 展望 19

参考文献 20

致 谢 21

第一章 维生素（Vitamin ）的综述

1.1 维生素（Vitamin ）Ergocalciferol

维生素（Vitamin ）分子式为C₂₈H₄₄O，在各国药典均有记载，中国药典2015版（Chp2015）记载本品为9，10-开环麦角甾-5，7，10（19），22-四烯-3β-醇。含有C₂₈H₄₄O应为97.0%-103.0%^[1]。 美国药典40版（USP40）^[2]，欧洲药典(EP9.2)^[3]，日本药典(JP17)以及国际药典都分别又详细的介绍了维生素的有关信息，包括有关物质，合成路线，分子式，化学性质，物理性质等，还有关于维生素可以制成的制剂种类，稳定性，检测限等。对于研究维生素有着不可取代的重要地位。

图1维生素（Vitamin ）的结构式

1.1.1维生素D（VitaminD）的发现

在很久以前的欧洲，流行着各种疾病，包括佝偻病、脚气病等。疾病带来的死亡是巨大的。在19世纪具有较大影响力的德国化学家Vonliebig提出了人体摄入的食物对疾病的影响^[4]。一直到20世纪初期，一些科研人员利用一些比例膳食成分饲养动物，结果动物没有办法生存^[5]。

在1914年，维生素A被美国研究员Elmer McCollum 和Marguerite Davis 在鱼肝油中发现^[6]。谁能想到在不到十年之后，维生素D就被发现。一开始研究人员并不知道维生素D 与其他维生素相比较是最为特别的一类维生素，它的特别之处在于人体本身可以通过皮肤暴露在阳光下合成。在1932年，德国的Windaus和英国的Askew两位科学家确定了维生素（Vitamin ）结构，并把它确定为一种甾醇。一直到20世纪50年代初期，人类才第一次合成维生素（Vitamin ），Kodicek成功地合成了维生素（Vitamin ）等的混合物，在此基础上，到1969年Suda等成功地分离得到成品。此后，国内外陆续展开了维生素（Vitamin ）的功能、作用原理和合成途径等方面的研究^[7]。

1.1.2维生素（Vitamin ）的合成路线^[8]

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