摘 要

实验目的：本研究通过体外细胞实验验证柠檬苦素对对乙酰氨基酚诱导的肝细胞凋亡的抑制作用。

实验方法：我们首先在体外建立APAP诱导的肝细胞损伤模型并进行给药干预，然后利用MTT实验来考察柠檬苦素对APAP诱导的L-02细胞损伤的影响；通过DAPI荧光染色实验来观察柠檬苦素对L-02细胞的形态学改变；利用Annexin-V/PI双染实验来检测细胞凋亡率；利用JC-1染色法来测定线粒体膜电位（MMP），我们通过以上方法的结果分析来验证柠檬苦素对APAP诱导的肝细胞凋亡的抑制作用。

实验结果：通过MTT实验、DAPI荧光染色实验、Annexin-V/PI双染实验以及线粒体膜电位检测实验发现，柠檬苦素通过减轻线粒体功能障碍来减轻APAP诱导的肝细胞凋亡，并且呈现出浓度依赖性。

关键词：柠檬苦素 对乙酰氨基酚 肝细胞凋亡

Inhibitory effect of Limonin on hepatocyte apoptosis induced by paracetamol

Abstract

Objective: In this study,the inhibitory effect of Limonin on paracetamol-induced hepatocyte apoptosis was verified by cell experiments in vitro.

Methods: We first established an APAP-induced hepatocyte injury model and intervened with drugs. Then we used MTT to study the effect of Limonin on APAP-induced L-02 cell injury; We observed the changes of L-02 cells by DAPI fluorescence staining;We used annexin-V/PI double staining to detect apoptotic rate; Mitochondrial membrane potential (MMP) was measured by JC-1 staining.

Results: MTT assay, DAPI fluorescence staining, Annexin-V/PI double staining and mitochondrial membrane potential detection showed that limonin could alleviate APAP-induced hepatocyte apoptosis by inhibiting mitochondrial dysfunction in a concentration-dependent manner.

Keywords: Limonin; Paracetamol (APAP); Hepatocyte apoptosis

目录

摘要 I

Abstract II

目录 III

第一章 文献综述 1

1.1柠檬苦素简介 1

1.1.1 柠檬苦素的结构和性质 1

1.1.2柠檬苦素的生物活性 1

1.1.3柠檬苦素的临床应用 3

1.1.4柠檬苦素的研究现状 3

1.2对乙酰氨基酚诱导的肝细胞凋亡 3

1.2.1 对乙酰氨基酚诱导的肝毒性 3

1.2.2 作用机制 3

1.3柠檬苦素在对乙酰氨基酚诱导的肝细胞凋亡中的抑制作用 4

1.4研究内容与意义 4

1.4.1 研究意义 4

1.4.2 研究内容 5

第二章 材料和方法 6

2.1材料和仪器 6

2.1.1 材料与试剂 6

2.1.2 实验仪器 7

2.2实验方法与步骤 7

2.2.1 细胞培养 7

2.2.2 建立对APAP诱导的肝细胞损伤模型及给药干预 7

2.2.3 MTT法检测柠檬苦素对APAP诱导的L-02细胞损伤的影响 8

2.2.4 Annexin-V/PI双染实验 8

2.2.5 DAPI荧光染色实验 9

2.2.6 线粒体膜电位检测（JC-1法） 10

第三章 结果与讨论 11

3.1 结果 11

3.1.1 柠檬苦素对APAP诱导的L-02细胞损伤的影响 11

3.1.2 Annexin-V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡 11

3.1.3 DAPI荧光染色法观察柠檬苦素对APAP诱导的L-02细胞凋亡的影响 12

3.1.4线粒体膜电位检测（JC-1法） 12

3.2讨论 13

第四章 结论与展望 15

4.1结论 15

4.2展望 15

参考文献 16

致谢 19

第一章 文献综述

1.1柠檬苦素简介

1.1.1 柠檬苦素的结构和性质

柠檬苦素（Limonin）广泛存在于我们的生活中。它是一类结构和功能特殊的化合物。从生源和结构来看，属于含呋喃环的三萜系（Triterpenoids）（结构见图1），实际上是三萜的降四碳产物。它具有高度活性，包括柠檬苦素糖苷和柠檬苦素糖苷配体在内的一系列化合物。

属于芸香科植物的柚、柑、桔、橙等水果的果核及种皮中富含柠檬苦素，尤其在柑橘的种子中富集。柠檬苦素是植物中重要的次生代谢产物，具有独特的口味，含有丰富的维生素、类黄酮、生物碱等物质，可作药用和食用。柠檬苦素易溶于烃类有机溶剂，在甲醇、乙醇中溶解度较大[1]，中性类基本不溶于水，有苦味；而酸性类可溶于水，无苦味。纯品为性质稳定的白色苦味结晶状物质。迄今为止我们已经发现了上百种柠檬苦素化合物，它们分别以甙元和糖甙的形式存在。一些含有柠檬苦素的水果之所以呈现苦味，就是因为甙元的存在。现已从柑橘属中分离了38 种柠檬苦素类似物甙元和20 种柠檬苦素类似物糖甙[2]。