摘 要

枣，鼠李科植物成熟果实。营养价值高，富含多种维生素、矿物质、氨基酸、环磷酸腺苷(cAMP)、黄酮等生物活性物质，具有多种药理活性，包括增强免疫、抗氧化、抗衰老、降低血脂等。

本文采用超声辅助法提取及测定和田玉枣中总黄酮的含量，并对影响实验的四个因素进行单因素实验，得到单因素下最优提取条件，采用L₉(3⁴)正交实验得到最佳提取条件，并通过正交实验结果验证最佳提取条件下提取结果。

通过各单因素实验得到，当其它各实验因素不变时，各单因素的最优水平分别为：乙醇溶液体积分数为60%、固液比为1:20 (g/mL)、超声温度为45 ℃、超声时间为15 min。通过正交实验优化得到和田玉枣中总黄酮的最佳提取工艺条件，结果显示，超声辅助提取的最佳提取条件为：乙醇溶液体积分数为50%、固液比为1:25 (g/mL)、超声温度为45 ℃、超声时间20 min。

关键词：和田玉枣 总黄酮 超声提取 正交实验

Abstract

Jujube,the ripe fruit of buckthorn plants,riching in Vitamins, minerals, amino acids, cyclic adenosine monophosphate (cAMP), flavonoids and other biologically active substances, has a variety of pharmacological activities, including enhancing immunity, antioxidation, antiaging and lowering blood lipids level.

The Ultrasonic-assisted Extraction and Determination of total flavonoids from Hetian Jade Jujube were studied,and the single factor experiments were conducted on the four factors affecting the experiment for the optimum conditions in the situation of single factor experiments.The optimum conditions were obtained through L₉(3⁴) orthogonal experiment and the results of which were tested.

通过单因素实验得到当其它因素不变时，各单因素的最优水平分别为：乙醇溶液浓度70%、料液比1:20、超声温度50℃、超声时间45min。通过正交实验得到吴茱萸中总黄酮的最佳提取工艺条件为：超声波法的最佳提取条件为70% 乙醇溶液、液固比40：1、超声温度40℃，超声提取30min。

By single factor experiment, when the other factors were invariable, the optimum levels of the single factor were: the ethanol concentration was 60%,the solid-liquid ratio was 1:20, the extraction temperature was 45 ℃,the extraction time 15 min. Was obtained by orthogonal experiment to optimize the extraction process of total flavonoids in Fructus evodiae: ultrasonic method of the optimum extraction conditions for 50% ethanol solution, liquid to solid ratio 20:1, ultrasonic temperature of 45 ℃, ultrasonic extraction 20 min.

并以此条件进行的三组验证实验得到黄酮提取率的平均值为31.09%。

总黄酮

Keywords: Hetian Jade Jujube Total flavonoids

超声提取

Ultrasonic extraction Orthogonal experiment

目 录

第1章 绪论 1

1.1枣的综述 1

1.2枣的药理作用 1

1.2.1中枢抑制作用 1

1.2.2保肝抑菌作用 1

1.2.3免疫增强作用 1

1.2.4抗衰老作用 2

1.2.5抗肿瘤作用 2

1.2.6抗变态反应 2

1.3红枣中的化学成分及其研究进展 3

1.3.1生物碱类 3

1.3.2皂苷类 4

1.3.3黄酮类化合物 5

1.3.4核苷类 5

1.3.5有机酸类 6

1.3.6其他化合物 8

1.4.黄酮类化合物 8

1.4.1黄酮类化合物简介 8

1.4.2黄酮类化合物的结构特征 9

1.5黄酮类化合物的生理活性 10

1.5.1抗氧化及抗自由基作用 11

1.5.2对心血管系统的作用 11

1.5.3对免疫系统的作用 11

1.5.4抗肿瘤、抗癌作用 12

1.5.5抗炎、抗菌、抗病毒作用 12

1.5.6其它作用 12

1.6黄酮类化合物的提取技术及研究现状 12

1.6.1溶剂提取方法 12

1.6.2微波法 13

1.6.3超声波辅助提取法 13

1.6.4超临界流体萃取法 14

1.6.5其它提取方法 14

1.7.黄酮含量的测定方法及其研究进展 14

1.7.1定性分析 14

1.7.2定量分析 14

1.8黄酮类化合物的开发应用 15

1.9本课题的研究内容及目的 15

第2章 实验方法 16

2.1 材料、试剂与仪器 16

2.2 测定波长的选择 16

2.3线性实验 17

2.4 实验设计 18

第3章 实验结果分析 19

3.1 单因素试验 19

3.1.1 乙醇溶液体积分数对总黄酮提取量的影响 19

3.1.2液固比对总黄酮提取量的影响 19

3.1.3提取时间对总黄酮提取量的影响 20

3.1.4提取温度对总黄酮得率的影响 22

3.2 正交试验 22

3.3 实验验证 23

第4章 结论 24

参考文献 25

致谢 28

第1章 绪论

1.1枣的综述

枣，鼠李科枣属植物的成熟果实，如今在世界上5个洲的30多个国家均有分布。人类进行人工栽培枣树的年限难以进行准确推断，根据古籍记载，枣树的栽培已有3000多年的历史^[1]。

枣是我国所特有的果品之一，原产中国。根据古籍记载以及大量的出土文物，3000多年前，我国黄河中下游一代，就已经出现了枣树的栽培中心，枣树就已经成为我国古代人民重要的栽培植物之一，为近现代枣树的栽培种植奠定了重要的基础。如今，枣因其早果丰产、丰富的营养价值、易于管理和良好的经济生态效益，已经成为了我国的主要栽培作物，亚洲、非洲、欧洲、大洋洲和美洲五大洲的很多国家均引入种植，但是大规模的经济商品栽培除韩国已形成外，并不多见^[2]。

1.2枣的药理作用

枣中含有丰富的营养物质，是上好的保健食品，具有多种保健功效。

1.2.1中枢抑制作用

红枣中的生物活性成分可以对机体的中枢神经起到一定的抑制作用。药理实验发现，枣中黄酮-葡萄糖甙(spinosin)、黄酮-双-葡萄糖甙A等多种化合物具有明显的镇定、催眠和降压作用。枣中的功效成分柚皮素-C-糖甙类可有效降低机体大脑的兴奋度，并减少对外界刺激的反应，还能够引起僵住症 ^[3]。

1.2.2保肝抑菌作用

李时珍《本草纲目》中记载：红枣“安中养脾”，是“脾之果”。枣具有调节血清总蛋白与白蛋白水平，提高机体抵抗力和免疫能力的功效，说明红枣在一定程度上可以减少有毒物质对肝脏的伤害，从而起到保护肝脏的作用。孙燕等研究发现，齐墩果酸对保护肝脏，防止癌变有一定疗效^[4]。

1.2.3免疫增强作用

红枣能够有效地增强机体的免疫能力，是因为红枣具有丰富的多糖、维生素和矿物质等。常江等研究发现，红枣的注射液能够增加小鼠免疫器官的重量，并在一定程度上增强小鼠非特异性免疫功能以及特异性细胞免疫功能^[5]。还有研究发现，定量红枣煎剂为小鼠灌胃7d，可以提高其腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分数和吞噬指数，灌胃达到15d时，对因环磷酰胺导致的白细胞、血小板和血红蛋白含量减少均有一定的恢复作用，同时可以在一定程度上保护骨髓造血功能^[6]。

1.2.4抗衰老作用

古籍上记载，枣可“悦颜色、通九窍”、“补中益气”“久服轻身延年”等，民间谚语曰：“一日吃三枣，一辈子不显老”，从多方面说明了红枣的抗衰老作用。红枣含有丰富的维生素，如：Vc、Vp等都具有很强的抗氧化作用，它们可以消除自由基，从而起到防止衰老的功效。刘秀芳等研究发现，小鼠自由饮用不同浓度下的红枣枸杞提取物30d后，小鼠红细胞内的SOD活性有了显著的提高，同时血浆中MDA的含量有了明显的降低，说明了红枣枸杞具有清除氧自由基和增强机体抗脂质过氧化作用的能力^[7]。

1.2.5抗肿瘤作用

红枣中的功效成分cAMP可以抑制癌细胞的增值，因此红枣具有抗肿瘤、防癌症的功效。cAMP是一种生理活性物质，可对细胞的增殖分化进行调控。如今已有研究证明，白血病和实体肿瘤的细胞中cAMP的含量较常人是降低的。魏虎来等通过研究红枣水溶性提取物体外对人体白血病K₃₆₂细胞的增殖抑制作用，发现红枣水溶性提取物对K₃₆₂细胞的增殖和集落形成能力有着显著的抑制作用，感染剂量中位数分别为25.50 mg/ml和9.46 mg/ml,这说明在红枣的水溶性提取物中含有有效的抗肿瘤成分。此外还令人在意的是，硒酸酯多糖在浓度≤50 μg/ml时对K₃₆₂细胞几乎没有作用，但加入到红枣水溶性提取物中则能显著促进其对K₃₆₂细胞的抑制作用，现已证实红枣中桦木酸、山楂酸等三萜类化合物具有抗肿瘤作用^[8]。

1.2.6抗变态反应

已有研究表明，红枣的水担物具有明显的抗变态反应作用。根据所进行的体外实验，未对致敏者外周血嗜性粒细胞添加任何刺激剂时，只有少量的白三烯产生，且来自于自发性释放，以抗体氮的抗IgE作为刺激剂时，可以观察到释放出的白三烯数量增加，当加入红枣提取液时，白三烯的释放的数量降低至与未加刺激剂大致相同的数量，表明红枣提取物对IgE刺激剂刺激人外周血嗜性粒细胞有明显的抑制作用。其抑制作用因红枣中的cAMP可透过白细胞膜进而作用到化学介质释放的第二期，从而抑制白三烯的释放，故红枣有一定的抗变态反应作用^[9]。

1.3红枣中的化学成分及其研究进展

对于红枣中功效成分的研究主要在皂苷类、萜烯类、黄酮类、有机酸、生物碱类、多糖的相关研究以及红枣的药理研究。其有机酸、皂苷、黄酮类成分是研究的热点。到目前为止共从红枣中分离到皂苷类化合物12种，有机酸33种，黄酮类化合物8种。

1.3.1生物碱类

枣属植物富含生物碱，多存在在植物的根皮和干皮等部位中，从大枣中也分离得一系列生物碱。目前在枣中发现的生物碱主要可以分为环肽类生物碱和异喹啉生物碱两类。其中环肽类生物碱按照骨架结构，可以分为具十三元环的间柄型(Ⅰ)和具十四元环的对柄型（Ⅱ），如图1.1和表1.1所示^[10]。

图1.1 枣中环肽类生物碱母核结构