一、 实验方案及原因：

（一）先以顺丁烯二酸酐（马来酸酐）（）作为原料，合成N-甘氨酸马来酰胺酸，再脱水闭环合成N-甘氨酸基马来酰亚胺。

（1）将一定量的马来酸酐、甘氨酸和醋酸混合然后再惰性气体下反应16个小时。

（2）反应混合物在冷却之前回流8个小时。

（3）在真空下除去溶剂。

（4）产品统一进行柱层析分离。

（5）产品部分旋蒸。

（6）干燥2个小时后收集最终产物，保存备用。

（二）合成多肽链

（1）树脂上接第一个氨基酸。

1.一定量的树脂和Fmoc（）保护的第一个氨基酸及DIPEA（ N，N-二异丙基乙胺，活化羟基），室温混合搅拌1h（用的是Fmoc保护这种方法）。

2.用DCM(二氯甲烷，惰性溶剂，有很强溶解性，除去未反应在树脂上的反应物）:甲醇（CH3OH）:DIPEA=17:2:1溶液缓慢过滤三次，每次40ml。

3.用DMF(N,N-二甲基甲酰胺，惰性溶剂，有很强的溶解性，除去未反应在树脂上的反应物)和DCM交错洗涤过滤各三次每次20ml，最后用DCM洗涤。

4.真空抽干。

5.测bead loading。

（2）树脂溶胀

1.溶胀树脂（用10mlDMF，静置至少30min)。

2.滤去DMF。

(三)依次上氨基酸

（1）脱去Fmoc:

①加入5ml20%哌啶(，去氨基保护基团)DMF振摇5min,滤去后用5mlDMF洗三次。

（哌啶起作用：

）

②再重复①两次。

③用5mlDCM洗三次。

④用5mlDMF洗三次（换新头）。

（2）上氨基酸：

①将上的Fmoc保护的氨基酸和HBTU(O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯，促使形成肽键)、DIPEA、DMF，混合于10ml小烧杯中，超声溶解。

②将混合物加于树脂中振荡2h。

③滤去DMF。

④用5mlDMF洗三次。

⑤用5mlDCM洗三次。

（3）重复（1）（2）分别上氨基酸。

（最后上MalG时不需要脱Fmoc)

（四）脱树脂

1.用30ml20%TFA(三氟乙酸CF3COOH)/DCM至室温搅拌两小时（第二个序列，需再加1ml三异丙基硅烷）。

2.过滤除树脂，用DCM洗涤树脂，收集滤液。

3.旋蒸除溶液。

4.加入冰乙醚沉淀多肽。

5.过滤的产物、干燥。

（五）过柱子

1.准备柱子。

2.塞下棉花（防砂漏掉）。

3.柱子放架子上，用试管测高度，并保证柱子垂直，倒英砂（SiO2，防硅胶漏掉）侧两边高度。

4.下边换接烧杯，加入硅胶，再用DCM冲洗盛硅胶的瓶子和柱壁。

5.开口下流，上部盖上盖（有充气装置），充气使溶液下流，使从上到下的第二个液面不漏出时停止下流。

6.加入一定量的DCM清洗一遍（主要去除硅胶中的气泡）再打开漏斗使其滴下且第二液面不漏出。

7.沿球形内壁加下产物，使其下流使产物和硅胶联合，加入石英砂保护产物不因加入液体而受冲击。

8.用DCM冲洗剩下的压到产物于硅胶下1-2mm。

二、进度安排

规划进度，分为以下部分：查阅文献、设计准备、论文写作、交阅初稿、修改、设计定稿、制作幻灯片、幻灯片定稿、论文答辩等事项。

2017.11-2017.12,并对实验内容细化。详细讲解实验目的内容。跟指导老师交流探讨并指导实验中的相关物品、操作、注意事项等。

2018.1：查阅文献，完成毕业论文开题报告。

2018.3：准备好实验所需资料，开始实验。 对设计中遇到的一些问题向指导老师求解答疑。

2018.4：实验中得到各种产物并测定相关性质。进行实毕业设计正文的撰写，进行数据处理，画图工作。

2018.5：上交毕业设计的初稿，让老师指导并帮助修改毕业设计。

2018.6：上交修改后的设计，审阅后定稿，制作PPT幻灯片。

2018.6：进行 PPT幻灯片审阅，幻灯片定稿，交流答辩注意事项，准备答辩。

三、预期效果

已经行部分实验，并得到相应产物并得到其质谱图和高效液相色谱图

1. MalG-VPGVGC 质谱图 （C28H41N7O10S667.73g/mol） 高效液相色谱空白和产物的对照

2. MalG-YGAPG 质谱图（C27H32N6O10600.58g/mol） 高效液相色谱图空白和产物的对照

四、合成反应流程图

（1）MalG-VPGVGC

（2）MalG-YGAPG