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摘 要

传统脂质体中含有主要成分为胆固醇和磷脂，为了减少用药时胆固醇的摄取，选用藻油脂肪酸代替传统脂质体中的胆固醇，同时藻油DHA的加入还可以病人适当补充DHA。通过固定磷脂的量，改变加入藻油脂肪酸的形式和用量优化脂质体组成，挑选出最稳定的DHA-Lip脂质体。脂质体的制备采用薄膜超声分散法结合挤出法，以获取粒径更小，更均一的脂质体。此外，为了达到加高的包封率和载药量，使用藻油DHA作为与阿霉素氨基组合的抗衡离子，在冰水浴和低介电常数的氯仿（ε = 4.7）中反应形成DOX-DHA离子对，增加了阿霉素的脂溶性。制备的离子对用红外光谱进行表征，并通过脂溶性实验检验其脂溶性的改变。DOX-DHA-Lip脂质体评估其平均粒径、多分散系数（PDI）、包封率（EE）和载药量(DLC)，并通过TEM观察DOX-DHA-Lip的粒径和形态。DOX-DHA-Lip粒径分布在137.4±0.1纳米，PDI为0.147±0.02，EE（%）和DLC（%）分别达到了78.4%和2.8%，具有较高的脂溶性、载药量和包封率，生物相容性高，能够提高药物治疗效果，具有一定的应用前景。

关键词：阿霉素 脂质体 藻油脂肪酸 离子对

Synthesis of Algal Oil Fatty Acid Doxorubicin Liposomes

Abstract

Traditional liposomes mainly contain cholesterol and phospholipids. In order to reduce cholesterol intake during use, algal oil fatty acids are used instead of cholesterol in traditional liposomes. At the same time, DHA can be supplemented with DHA. The most stable DHA-Lip liposomes were selected by optimizing the amount of phospholipids, changing the form and amount of fatty acid added to the algal oil to optimize liposome composition. Liposomes were prepared by membrane ultrasonic dispersion combined with extrusion to obtain smaller, more uniform liposomes. In addition, in order to achieve an increased encapsulation efficiency and drug loading, algae oil DHA was used as a counter ion in combination with doxorubicin amino group, and reacted in an ice water bath and a low dielectric constant chloroform (ε=5.1) to form DOX- DHA ion pair increases the fat solubility of doxorubicin. The prepared ion pairs were characterized by infrared spectroscopy and their fat solubility changes were tested by lipolysis experiments. The average particle size, polydispersity coefficient (PDI), encapsulation efficiency and drug loading of DOX-DHA-Lip liposome were evaluated, and the particle size and morphology of the liposome were observed by transmission electron microscopy. The DOX-DHA-Lip particle size is 137.4±0.1 nm, the PDI is 0.147±0.02, and the encapsulation efficiency and drug loading content reach 78.4% and 2.8%, respectively. It has high fat solubility, drug loading and encapsulation efficiency. With higher biocompatibility, the drug effect has been enhanced, and has certain application prospects.

Keywords: doxorubicin; liposomes; algal oil fatty; ion-pair

目录

摘要 I

Abstract II

第一章 绪论 1

1 前言 1

1.1 阿霉素（DOX） 2

1.2 脂质体 3

1.2.1 脂质体的结构类型 3

1.2.2 脂质体的制备方法 3

1.2.3 阿霉素脂质体的研究进展 3

1.3 藻油脂肪酸 4

1.3.1 DHA的结构和生理功能 4

1.3.2 DHA的来源及应用 5

1.3.3 DHA的分离和富集方法 5

1.4 离子对方法 5

第二章 实验部分 7

2.1 实验药品和仪器 7

2.1.1 主要实验仪器 7

2.1.2 主要药品 7

2.2 脂质体的合成及组分优化 8

2.2.1 藻油DHA脂质体的合成 8

2.2.2 游离脂肪酸FFA脂质体的合成 8

2.2.3 胆固醇脂质体的合成 9

2.2.4 脂质体平均粒径及多分散系数（PDI）测定 9

2.3 DOX·HCl紫外标准曲线 9

2.4 离子缀合物DOX-DHA的合成 10

2.4.1 盐酸阿霉素水溶液荧光标准的曲线绘制 10

2.4.2 盐酸阿霉素（DOX·HCl）脱酸 11

2.4.3 DOX溶液紫外标定曲线绘制 11

2.4.4 合成离子对缀合物DOX-DHA 11

2.4.5 离子对缀合物 DOX-DHA的红外表征 12

2.5 藻油脂肪酸-阿霉素脂质体的合成及表征 13

2.5.1 藻油脂肪酸-阿霉素脂质体（DOX-DHA-Lip）的合成 13

2.5.2 DOX-DHA-Lip粒径及PDI测定 13

2.5.3 透射电镜 13

2.5.4 脂溶性实验 13

2.5.5 包封率和载药量的测定 14

第三章 实验结果与讨论 15

3.1 空白脂质体组分优化 15

3.2 离子对缀合物DOX-DHA的红外表征 17

3.3 脂溶性试验 18

3.4 藻油脂肪酸-阿霉素脂质体的表征 19

3.5 结论与展望 20

参考文献 21

致 谢 25

第一章 绪论

1 前言

癌症是人人谈之色变的疾病，而且其发病率和死亡率逐年上升，更加先进和优良的治疗手段亟待研究来克服这一疾病，药物治疗是治疗癌症的一个重要手段。阿霉素是一种蒽环广谱抗癌药物，具有很强的药理活性，已经应用于治疗多种恶性肿瘤及癌症，如乳腺癌、甲状腺癌、膀胱癌、恶性淋巴瘤和急性白血病等^[1].但它也有很强的毒副作用，一方面影响了病人的生存质量，另一方面也在一定程度限制了阿霉素的应用与发展。新型纳米材料和纳米载体的开发应用为改善癌症中的药物递送及靶向性提供了新的方向。阿霉素已被制成多种形式，包括脂质体，脂质囊泡，固体脂质纳米粒等，其中脂质体被认为是最先进的颗粒类型药物载体，作为主流药物输送系统已经获得了重要地位。脂质体的重要性在于可以包含亲水性，亲脂性和两亲性药物，即将亲水性分子装载在脂质体的内腔，而将疏水性分子包埋于脂质双分子层中^[2]。脂质体有较强的增溶能力，具有双层膜结构，能与细胞膜较好地融合渗透，能够提高药物的生物利用度和稳定性，经过修饰的脂质体还具有良好的靶向性和缓释作用，从而提高药物疗效，减少抗癌药物对正常细胞的毒性和药物利用率。实验研究表明，脂质体载药后明显减少了药物与细胞膜的结合，增加了药量，脂质体载体与阿霉素等亲水性药物的结合可提高治疗效果^[3]。

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