论文总字数：16059字

摘 要

在我国，糖尿病的发病率仅次于心脑血管疾病及肿瘤，并且在不断增长中。糖化血红蛋白(HbA_1c)均是临床上诊断糖尿病的重要指标, POCT检测HbA_1c是当前的研究热点。本实验是在已知的硼酸亲和层析基础上改进，将柱色谱换成常见的试片，考察了一系列耗材（各种型号的玻璃纤维膜、聚酯纤维膜和吸水纸）的性能，优选了各项性能优良的吸水纸材质来制作试片；设计了试片的3D层析结构；用于洗脱血红蛋白的第一缓冲液暂选0.1 mol·L^-1、pH 6.5的MES（2-(N-吗啉代)乙磺酸）缓冲液，第二缓冲液暂选0.5 mol·L^-1、pH 9.5的乙酸铵缓冲液，并自制了合适的溶血剂。通过多次纸层析试验，我们验证了实验的可行性，并选择10min为吸水纸在间氨基苯硼酸溶液中的最佳浸泡时间。本课题将会在一定的程度上推进家用型糖化血红蛋白仪的普及，帮助更多的糖尿病患者进行日常的糖尿病的监测工作，应用前景十分良好。

关键词：糖化血红蛋白试片 亲和层析 间氨基苯硼酸 即时检测

ABSTRACT

In China, the incidence of diabetes is next to cardiovascular disease and cancer, and grows constantly. Glycated hemoglobin (HbA1c) is an important indicator of diabetes diagnosis clinically, Using POCT to detect HbA1c is the current hot topic. This experiment improves based on boric acid affinity chromatography, and the common column chromatography is replaced by the test strip, we investigate the performancea of series of supplies (all kinds of types of glass fiber membrane, polyester membrane and absorbent paper) , choose the absorbent paper which has the excellent performance to make test strip; design 3D chromatography structure of the test piece; MES ( 2- (N- morpholino) ethanesulfonic acid) buffer solution which is 0.1 mol·L-1, pH 6.5 is choosed temporarily as the first buffer solution to elution of hemoglobin,ammonium acetate buffer solution which is 0.5 mol·L-1,pH 9.5 is choosed temporarily as the second buffer solution, and the homemade suitable hemolytic agent. Through several paper chromatography test, we verify the feasibility of the experiment, and select 10min as the optimum soaking time when absorbent paper soak in the aminophenyl boronic acid solution. This paper will advance the popularity of household type glycated hemoglobin analyzer to a certain extent, and help more patients with diabetes monitor diabetes daily , the prospect is very good.

KEYWORDS：Glycosylated hemoglobin test pieces；Affinity Chromatography；M-aminophenyl boronic acid；Point-of-Care Testing

目 录

摘要……………………………………………………………..………………….…I

ABSTRACT……………………………………………………………………..…Ⅱ 目 录………………………........................................................................................1

第一章 文献综述 2

1.1 研究背景 2

2.1 糖化血红蛋白简介 2

3.1 糖化血红蛋白检测方法概述 3

3.1.1糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白电荷的差异 3

3.1.2 基于血红蛋白上糖化基团的结构特点 4

3.1.3 基于抗原抗体反应 5

3.1.4 免疫传感器法 5

3.1.5 床边检测 6

4.1本文研究内容及意义 6

第二章 糖化血红蛋白层析试纸片的初步研究 8

2.1 实验试剂与仪器 8

2.1.1 试剂 8

2.1.2 仪器 8

2.2 实验原理 9

2.3 实验过程 10

2.3.1 溶液的配制 10

2.3.2 试纸条结构的设计 11

2.3.3 试纸片的制作 12

2.3.4 试纸片的选材 12

2.3.5 试纸片最佳浸泡时间的选择 13

2.4 实验结果与讨论 13

2.4.1 验证可行性 13

2.4.2纸的材质对结果影响的讨论 14

2.4.3 纸的浸泡时间对结果影响的讨论 16

2.5 结论与展望 17

参考文献 19

致谢 22

第一章 文献综述

1.1 研究背景

糖尿病是一种长期危害人类健康的慢性疾病，是由于免疫功能紊乱，遗传因素等各种致病因子而诱发胰岛素抵抗、胰岛功能减退等现象，从而导致体内代谢失衡以及高血糖的状态^[1]。该病还会引发多种并发症，长期患有糖尿病一般都伴随有泌尿系统、神经系统、心血管系统等多种系统的伤害，而且该病还存在着“三高三低”的现象，即患病率高、致残率高、死亡率高，但知晓率低、控制率低、治疗率低。目前，全球的糖尿病患者约为2亿人，未来10年因糖尿病致死的人数会增加50%，发病率仅次于肿瘤和心脑血管疾病。在亚洲糖尿病的情况更为严峻，约10%的亚洲成年人确诊为糖尿病。据世界卫生组织预测，2025年我国的糖尿病总人数将达到5000万人，是1995年人数的1.68倍，增长率排全球第一^[2]。该病的严峻形势引发了人们的高度重视，糖尿病的防治工作已经刻不容缓，各国已将糖尿病的防治工作列为重要课题^[3]。

2.1 糖化血红蛋白简介

糖尿病病人血糖的检测工作目前在临床上已积极地开展，截至当前有很多的检测方法，但是检测血糖只能监控现在的血糖水平^[4]，和病人是否空腹，是否使用胰岛素以及取血时间有关，受偶然因素影响波动较大，并不能作为衡量疾病控制程度的标准。1958年，Huisman和Meyering两人利用柱色谱首次将糖化血红蛋白（HbA_1c）从血红蛋白中分离出来^[5]，它可以有效地反映较长周期内血糖的真实水平^[6]。至今，HbA_1c作为较衡量疾病控制程度的标准在医院进行了广泛应用。

人体内有三种正常的血红蛋白分为血红蛋白A ( HbA ) , 血红蛋白 A2 (HbA2)以及血红蛋白 F(HbF) , HbA是成年人体内红细胞的主要成分。糖化血红蛋白含有HbA_1a,HbA_1b和 HbA_1c这三种含糖成分，利用层析法分离血红蛋白时可被洗脱出。糖化血红蛋白是由人体红细胞中的血糖与血红蛋白结合所产生的。血糖不需要胰岛素的参与，以弥散的方式进入细胞，糖基化的过程缓慢且不可逆，它会在在红细胞死亡前一直存在，不断累积，直至红细胞完成生命周期被代谢掉。血红蛋白存在于每一个红细胞中，120天左右为红细胞的生命周期，所以前3周到3个月内的血糖的平均水平能通过糖化血红蛋白的比例进行反应。糖化血红蛋白的数量越多，则表示糖尿病的病情越严重。20世纪70年代末，糖化血红蛋白检测开始被用于常规实验室，发展到如今，检测糖化血红蛋白已被作为重要的指标去衡量糖尿病控制程度。在国外，检测糖化血红蛋白水平已被视为衡量糖尿病治疗效果以及糖尿病整治工作的“金指标”^[7]。

3.1 糖化血红蛋白检测方法概述

糖化血红蛋白的检测方法近年来越来越受关注，根据其原理及其性质主要分为几下几类：第一类根据其带电荷的不同，如电泳法^[8]，高效液相层析^[9-12]，离子交换层析法^[13]等；第二类是基于糖化血红蛋白基团的结构性质，如亲和层析法，酶法等；第3类是依据抗原和抗体的反应原理，如免疫比浊法^[14]，离子捕获法等；第4类是结合了电化学和免疫反应的传感器的方法，如免疫传感器法；第5类是在床边检测的方法（POCT）。

3.1.1糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白电荷的差异

（1）HPLC

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