1. 研究目的与意义（文献综述）

1.1 寡糖概述

寡糖（os）是通常由2-20个单体通过各种o-糖苷键连接组成的碳水化合物。构成寡糖的单糖结构单元主要是五碳糖和六碳糖,基本上由六种单糖所组成,即葡萄糖(glu-cose)、果糖(fructose)、半乳糖(galactose)、木糖(xylose)、阿拉伯糖(arabinose)和甘露糖(man-nose)等。^[1,4]

寡糖由于其具有高选择益生元活性成为了新兴研究的目标，益生元是不能被人类消化酶消化的膳食成分，但它们通过选择性地刺激一种或有限数量的宿主肠道微生物群的生长而为宿主提供健康益处。^[2]其益生元活性主要体现在其在免疫调节、降低血糖、增强造血功能和保护胃肠道等方面。^[4,11,12,13]

2. 研究的基本内容与方案

2.1 研究（设计）的基本内容

本研究拟利用一种柱前衍生化方法-还原氨氧化法对寡糖进行标记与液相色谱-荧光检测，对咖啡等食品中的寡糖进行定性定量分析。首先，利用研磨机对咖啡豆进行研磨，在100 mL纯水中煮沸20min持续搅拌，得到液体提取物。测得所得提取物的pH，进一步利用Folch法，将一体积的提取物与四体积氯仿与甲醇（2:1,v:v）的混合物混合，除去共同提取物中的大部分脂质和一些蛋白质。将混合物在4℃下以4000g离心30分钟。将含有OS的上层水层真空干燥，重新溶于纯水中，并进行固相萃取。^[9]

使用C18、C8、MCC、多孔石墨化碳等不同的填料，以及不同浓度的洗脱液进行固相萃取，再将取得的寡糖样品衍生化，采用HPLC荧光检测对衍生产物检测，获取样品中寡糖的种类与丰度数据，通过数据分析取得最优化分离和富集条件，并研究该咖啡样品中寡糖来源及其成因。

2.2 研究目标

1.利用还原氨氧化法与聚糖衍生化，并找到最优化条件；

2.探究合适的食品样品前处理方法；

3.定性定量分析食品中的寡糖，揭示寡糖的来源和成因。

2.3 技术路线图

3. 研究计划与安排

第1——2周：查阅相关文献资料，明确研究内容，了解研究所需药品、仪器。确定方案，完成开题报告；

第3——6周：探究提取和富集寡糖的方式，得到最优获取寡糖的条件；

第7——8周：探究还原性氧化胺化和荧光标记的柱前衍生最优方式；

4. 参考文献（12篇以上）

[1] eggleston, g.; cote, g. l. oligosaccharides in food andagriculture. in oligosaccharides in food and agriculture; eggleston, g., cote,g. l., eds.; american chemical society: washington, dc, 2003; pp 1#8722;14.

[2] gibson, g. r.; probert, h. m.; van loo, j.; rastall, r.a.; roberfroid, m. b. dietary modulation of the human colonic microbiota:updating the concept of prebiotics. nutr. res. rev. 2004, 17, 259#8722;275.

[3] 王萍. 固相萃取新技术研究进展[j].治淮, 2015(01): 44-45.