1. 研究目的与意义（文献综述）

蛋白质的糖基化修饰是最常见、最重要的蛋白质翻译后修饰之一。目前已知哺乳动物蛋白质中至少有二分之一是糖蛋白，广泛分布于各种组织和细胞中，特别是在细胞膜表面，体液中含量丰富¹。异常的蛋白质糖基化修饰与多种疾病有关，如癌症、糖尿病等，在现代医学诊断中，常常使用该种异常来确定患病种类，同时许多中药材和天然产物中的有效成分也与糖肽有关。并且糖基化修饰在存在着诸多生物学功能，如蛋白的折叠、生物体免疫、细胞间信息的传递等。所以，通过现代化学分析手段得知糖肽的组成和结构，以此来指导糖肽的定量定性分析、合成制备和药物开发。

传统的研究方法需要将糖基化修饰的糖蛋白使用蛋白酶切之后得到含有糖链的糖肽，然后通过去糖基化得到多肽链和含糖链的样品，最后将多肽链和含糖链的样品分别用质谱进行检测，由于将多肽链和糖链切断，消除了由于两者之间存在较大差异而对测试带来难度的影响，但与此同时也无法得到多肽链和糖链之间相互联系。

综上，本实验通过将糖蛋白经蛋白酶酶切之后，直接使用糖肽通过质谱测试，以得到更完整的信息。完整的糖肽的直接质谱分析需要解决的问题：①分离富集问题：大多数糖蛋白在样品中的丰度相对较低，蛋白糖基化的微不均一性特征，即每个糖基化位点上可以连接多达几十个不同糖链，进一步降低了完整糖链的浓度，故有效的分离富集方法是糖肽研究首先要解决的问题。②质谱分析问题：由于完整的糖肽链分子量较大，且糖链部分比多肽部分更易碎裂。③数据处理。

2. 研究的基本内容与方案

3.2.1 实验样品

在本实验中我们使用rnase b作为标准蛋白。

3.2.2 标准糖蛋白的酶解

(1)称量2.00 mg核糖核酸酶b（rnaseb）溶于50 mmol/l碳酸氢铵缓冲溶液中。

(2)加入dtt（250 mmol/l）的水溶液，使其终浓度为5 mmol/l，在37℃下水浴45 min。

3. 研究计划与安排

第1——3周：查阅相关文献资料，明确研究内容，了解研究所需药品、仪器。确定方案，完成开题报告。

第4 ——8周：完成三种酶解的糖肽样品制备；

第9 ——12周：完成糖肽样品的上机测试；

4. 参考文献（12篇以上）

[1] 米薇. 蛋白质组学相关技术及其在正常人肝组织和肝癌研究中的应用. 博士, 中国人民解放军军事医学科学院, 2008.

[2] 路越. 整体柱硼亲和色谱—生物质谱联用方法对糖蛋白的富集及检测. 硕士, 南京大学, 2012.

[3] 李恒辉. n-聚糖质谱检测新方法研究及应用. 博士, 华中科技大学, 2016.