２．本课题要研究或解决的问题和拟采用的研究手段（途径）：

研究目标：

1）ARTP诱变法提高赤霉素4 7产量。

2）对影响赤霉素产量的单因素进行优化，并最终通过响应面法得到最佳发酵条件。

研究内容：

本课题在传统技术的基础上，结合国内的发酵工业状况，采用微生物发酵法获得赤霉素4 7。首先我们实验中则采用ARTP方法来对菌株进行诱变，以期望获得高产菌株，提高赤霉素4 7的产量。其次，对影响赤霉素产量的单因素进行优化，并最终通过响应面法得到最佳发酵条件，为进一步开展藤仓赤霉的工业育种奠定基础。

拟解决的主要问题：

1) 原生质体的制备，ARTP实验操作时功率、时间、初筛复筛平板的选择。

2）各项单因素对赤霉素4 7发酵产量的影响。

3）最终探讨获得赤霉素4 7的最优生产条件。

研究思路与方法：

首先通过查文献获得赤霉素4 7的发展状况，并从文献中获得赤霉素诱变的具体方法步骤。其次确定实验中的初筛复筛平板，进一步减小筛菌的工作量。最后对发酵条件进行优化，得到最佳条件。

技术路线：

试验方案：

1）利用生物发酵法发酵生产赤霉素4 7，将菌种诱变后利用初筛平板进行筛选，得到产量较高的菌株；

2）多次诱变后得到产量最高的藤仓赤霉菌高产菌株；

3）对藤仓赤霉菌发酵单因素条件进行优化

4）响应面法得到最佳发酵条件

可行性分析：

1）技术上可行：近年来，随着分子生物学方法技术的渗透与应用，在赤霉菌分子生物学研究方面取得了许多进展，特别是微生物代谢产物生物合成调控机制研究的进展，各种特定的推理选育方法不断建立，为筛选高产赤霉素生产菌株提供可能。

2）工作基础良好：1、查阅文献，熟悉赤霉素的相关研究 2、熟悉实验室基本操作安全并规范操作实验室仪器设备3、现在已经对实验方案进行深入研究，掌握了具体地操作方法和关键步骤。

3）工作条件优越：本项目依托单位为南京工业大学生物与制药工程学院、江苏省工业生物技术创新中心，拥有开展本项目研究的相关仪器设备和配套设施。