AXE酯酶催化合成过氧乙酸开题报告
2020-05-26 20:23:36
1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)
文 献 综 述 1.乙酰木聚糖酯酶 乙酰木聚糖酯酶,缩写axe,英文名称是acetyl xylan esterases,axes (e.c 3.1.1.7),作用是使天然木聚糖中木糖残基上c2和c3位置的乙酰取代基[1]被水解。
在植物细胞壁中广泛存在着连接一些阿拉伯糖基、乙酰基等基团的聚合物。
尤其在硬木当中,乙酰化木糖的成分高达60-70%[2]。
2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
本课题通过对大肠杆菌发酵培养,再进行破胞得到具有过水解催化活性的axe脂肪酶,利用酶液催化生产过氧乙酸并检测其含量,比较化学法与酶法制备的过氧乙酸的性能:包括稳定性,腐蚀性,杀菌效果,残留量等。
(1) 出发菌株:大肠杆菌(escherichia coli)bl21/pet-cah; (2) 种子培养:培养基:lb培养基:酵母粉 5g/l,蛋白胨10 g/l,氯化钠10 g/l; 培养条件:250 ml三角瓶,装液量50 ml,培养温度37℃,摇床转速200 r/min,培养12 h; (3) 发酵培养:培养基组成:lb培养基:酵母粉 5g/l,蛋白胨10 g/l,氯化钠10 g/l;培养条件:接种量1.5%(v/v),发酵温度37 ℃,当od达到0.6~0.8时,加异丙基-β-d-硫代吡喃半乳糖苷(iptg)诱导,iptg的终浓度1.0 mmol/l,摇床转速180~250 r/min,发酵2-10 h。
(4) 粗酶液的获取:取出发酵液,8000rpm离心3min,加入1/8 原发酵液体积的tris-hcl(ph 7.0),浓缩8倍;超声破碎400w、3s 工作时间,7s 间隙时间,超声4min (24次);离心6500 rpm、10 min。